TaqMan™ Cells-to-CT™ 对照试剂盒
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TaqMan™ Cells-to-CT™ 对照试剂盒

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Ambion™ TaqMan™ Cells-to-CT 对照试剂盒设计为与 TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT 试剂盒配合使用。控制试剂盒包括了解更多信息
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4386995100 reactions
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Ambion™ TaqMan™ Cells-to-CT 对照试剂盒设计为与 TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT 试剂盒配合使用。控制试剂盒包括 XenoRNA™ 对照、合成 RNA 转录本(具有与当前带注释的生物序列缺乏同源性的独特序列),使其成为任何实验的理想对照品。对照试剂盒还包括用于 XenoRNA™ 对照靶标的 TaqMan™ 基因表达实验试剂盒和用于高表达内源参照基因 β-肌动蛋白的 TaqMan™ 基因表达试验试剂盒。

Ambion™ TaqMan™ Cells-to-CT 对照试剂盒的特点:
•确认足够的细胞起始量
• 监测是否存在 RT 或实时荧光定量 PCR 抑制剂
• 样品归一化对照品

监测抑制并确认足够的细胞起始量
TaqMan™ Cells-to-CT™ 对照试剂盒用于评估 Cells-to-CT 反应中等抑制和细胞起始量。例如,XenoRNA™ 对照品确认样品可以支持 RT-PCR,并且是反应抑制剂的指标。通过在细胞裂解程序的最后一步中向终止液中加入 XenoRNA™ 对照品,为每份样品提供恒定量的对照靶标,随后通过 XenoRNA™ TaqMan™ 基因表达检测进行扩增。

使用 β-肌动蛋白基因表达测定试剂扩增作为归一化的内源对照品,并确保裂解反应包含足够数量的细胞 — 这对于少于∼100 个细胞的实验非常重要,并监测细胞裂解的有效性。

评价与新细胞系的兼容性
TaqMan™ Cells-to-CT™ 对照试剂盒是评估未检测细胞系与 TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT 试剂盒兼容性以确定每次裂解反应可使用的最大细胞数量的理想选择。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
控制模板XenoRNA™ 对照品(合成 RNA 转录本)
产品规格管装
基因符号ACTB
环保功能所用资源更少、废弃物更少、危害更小
内部探针修改MGB(小沟结合物)(3')、不发出荧光淬灭剂 (3')、FAM (5')
反应次数100 次反应
产品线Ambion™,Cells-to-CT™,TaqMan™
产品类型Cells-to-C 对照试剂盒
数量100 reactions
运输条件干冰
足够用于100 次反应
靶标XenoRNA™ 对照品、β-肌动蛋白
检测方法引物-探针
适用于(应用)Gene Expression
高 GC PCR 扩增效果
标签或染料FAM
PCR 方法qPCR
Unit SizeEach
内容与储存
Xeno™ RNA 对照品、20X Xeno™ RNA 对照 Taqman™ 基因表达检测试剂盒和 20X ACTB(β-肌动蛋白)TaqMan™ 基因表达检测试剂盒储存在 -20°C 下。正确存放时,所有试剂均可保证 6 个月的稳定。

常见问题解答 (FAQ)

完成Cells-to-CT实验后,在没有反转录的阴性对照中出现PCR产物。这表示什么?

如果在没有反转录的阴性对照反应中出现PCR产物,而非无模板对照中,则表示RNA样品中仍存在基因组DNA,并且在实时PCR中扩增了基因组DNA。请参考以下建议:

•确保DNase I完全混入裂解液中。
•减少每次裂解反应的细胞用量。
•使用室温下的裂解液裂解细胞,确保裂解反应在室温下发生。

也可尝试延长裂解反应的孵育时间至8分钟,和/或使用已经升温至25°C的裂解液裂解细胞。

完成Cells-to-CT实验后,在无模板PCR对照中出现PCR产物。可能有哪些原因?

在无模板PCR对照中出现PCR产物,表示存在DNA污染。为控制污染,需要采取更为严格的步骤。

进行了Cells-to-CT实验之后我没获得PCR产物或获得了预期之外的PCR产物。可能有哪些原因?

请查看以下可能原因和建议:

•加入和混合终止液出现问题:确保将终止液直接加入到裂解物中。如果裂解液的成分未完全灭活,可能会抑制RT-PCR。
•RNA发生降解:开始细胞裂解步骤前,将细胞保存在PBS中并置于冰上。
•样品中的RNase未完全灭活:可能使用了过多细胞或细胞中加入过多PBS,稀释了裂解液。
•样品在恢复到室温前放置太久:加入终止液后,不要将裂解物放置在室温超过20分钟。
•样品不含目标RNA:通过使用样品中的XenoRNAControl确认操作流程是否正常。同时,应确认PCR引物能够在您所使用的PCR条件下扩增目标分子。

Cells-to-CT实验中的终止液用完了。能否单独购买?

可以,该产品具有1mL分装形式(货号 4402960)。

我的Cells-to-CT反应中有基因组DNA污染,该如何除去污染?

1.确保从孔中移去了所有培养基。
2.移去培养基后,使用相同体积的室温1X PBS洗涤。
3.确保反应在室温下发生(如果将反应板置于冰上、将反应板快速转移至实验台或使用了冰冷的裂解液,则裂解反应可能不会达到室温)。
4.将裂解液恢复至室温后,再加入到细胞。
5.使裂解反应在25°C下持续8分钟。