TaqMan检测方法——5个有趣事实

1. Pac-Man^TM 到TaqMan

最初，Applied Biosystems™ TaqMan™检测方法（Assays）是以1980年代的吃豆人™电子游戏命名的。吃豆人这款游戏由日本电子游戏设计师岩谷彻（Toru Iwatani）创作，并在引入美国后变得极为流行。描述 TaqMan 技术的原始论文，作者注意到外切酶活性与Taq聚合酶与吃豆人游戏有相似之处。当Taq聚合酶遇到探针时，在合成新的扩增子过程中会将其“咬碎”；这导致探针中的报告分子和淬灭分子被物理分离。因此，荧光信号会随着产物的倍增而成比例增加。

2. TaqMan 检测试剂涵盖多种应用领域

赛默飞世尔科技是 TaqMan 检测试剂的市场领导者，这些试剂涵盖了包括基因和 miRNA 表达分析、SNP 基因分型、拷贝数变异分析以及稀有突变检测在内的多种应用。它们采用高度复杂的寡核苷酸探针/引物设计流程，包括强大的引物设计算法以及广泛的生物信息学工具和流程，实现检测方案设计的自动化。

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3. TaqMan探针设计

TaqMan探针旨在实现或接近100%的反应效率，并采用专有的探针（MGB-NFQ）以提高特异性。

所有TaqMan探针都包含三个组成部分：

• 5’端：荧光报告染料
• 3’端：非荧光猝灭剂（NFQ）
• 同样在3’端（与NFQ连接）：次沟结合剂（MGB）

5′端的荧光报告染料由qPCR仪器检测，用于定量样品中扩增产物的数量。当聚合酶遇到TaqMan探针时，其5′核酸酶活性会切割探针，使染料与猝灭剂分离。每一个PCR循环，更多的染料分子被释放，导致荧光强度随扩增产物合成量增加而增强。

3′端的NFQ会猝灭5′端的荧光报告染料，直到通过外切酶活性将其分离为止Taq聚合酶。使用NFQ代替荧光猝灭剂能够提高检测的灵敏度，因为它提供了更高的信噪比。

TaqMan探针上的NFQ能够最大限度地减少背景信号，而智能化的PCR引物和探针设计则最大化扩增效率，并允许高灵敏度和准确性，从而可靠地检测到10份或更少的目标分子。

MGB是一种小分子，可以紧密嵌入双链DNA的小沟中。MGB能够在不增加探针长度的情况下提高熔解温度（Tm），因此可以为难以设计的序列（如富含AT的序列）设计探针，使得跨外显子边界设计探针变得更加容易。

相关内容：视频 – TaqMan实时PCR检测方法如何工作——TaqMan检测背后的科学原理

4. 2000万条预设计TaqMan检测方法

性能有保障

目前已有超过2000万条预先设计好的TaqMan检测方法性能有保障并经过优化，让您能够更快获得结果，而无需花时间测试和优化检测参数。

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5. TaqMan检测已被超过200,000篇出版物引用

MIQE指南合规性

TaqMan探针MIQE指南作为可信来源被持续使用——已在超过200,000篇出版物中被引用。TaqMan探针符合MIQE指南（定量实时PCR实验发表的最低信息要求），Thermo Fisher提供所有必要的信息，确保您在发表实时PCR实验结果时能够遵循MIQE规范。

相关内容：: 视频 – 第28集：MIQE指南与TaqMan探针

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观看本文提及的视频

1. TaqMan实时PCR检测方法的工作原理——Taq Talk 第4集
2. 实时PCR（qPCR）检测设计技巧——Taq Talk 第6集
3. 如何测量检测方法的PCR效率——Taq Talk 第8集
4. 如何使用SYBR Green检测优化qPCR——Taq Talk 第21集
5. MIQE指南与TaqMan检测方法——Taq Talk 第28集
6. Applied Biosystems TaqMan 检测视频

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