Fc 受体封闭是什么？流式细胞实验中的必要性与实操建议

什么是Fc受体封闭？

提到Fc受体封闭，首先要弄清楚什么是Fc受体。Fc受体是一类表达在某些细胞比如粒细胞、B淋巴细胞、树突细胞、巨噬细胞及自然杀伤细胞等细胞表面的受体蛋白 （图1）。Fc受体能够跟抗体的Fc段结合（图2），通过跟抗体的结合，Fc受体能够促进病原体、肿瘤细胞或者被感染细胞的清除（图3）。通过某种方式阻断Fc受体和抗体结合就叫做Fc受体封闭。

IgG是最常见的抗体类型，而能够跟IgG结合的Fc受体称为Fcγ受体，主要分为FcγRI (CD64)、FcγRIIa (CD32a)、FcγRIIb (CD32b)、FcγRIIc (CD32c)、FcγRIIIa (CD16a) 和FcγRIIIb (CD16b)。

图1. Fcγ受体的主要类型及其分布的细胞类型。+, 组成性表达; –, 不表达; #, 诱导性表达; *, 表达依赖于FCGR2C等位基因状态。图片出处：Bournazos, S., Gupta, A. & Ravetch, J.V. The role of IgG Fc receptors in antibody-dependent enhancement. Nat Rev Immunol 20, 633–643 (2020). https://doi.org/10.1038/s41577-020-00410-0.

图2. IgG抗体结构及其与Fc受体结合的示意图。图片出处：Barb AW. Fc γ receptor compositional heterogeneity: Considerations for immunotherapy development. J Biol Chem. 2021 Jan-Jun;296:100057. doi: 10.1074/jbc.REV120.013168.

图3. Fc受体通过与抗体结合促进病原体，肿瘤细胞或者被感染细胞的清除。图片出处：Kang TH, Jung ST. Boosting therapeutic potency of antibodies by taming Fc domain functions. Exp Mol Med. 2019 Nov 18;51(11):1-9. doi: 10.1038/s12276-019-0345-9.

为什么要做Fc受体封闭？

对于这个问题，相信同学们在了解了什么是Fc受体及其特性之后也能猜出大概。没错，我们使用的流式抗体能够通过Fc段与细胞上的Fc受体结合，这种结合对于我们的流式实验来说就是一种“非特异性”的结合，会造成高背景和假阳性等问题。

在图4中，我们将未经Fc受体封闭和经过Fc受体封闭的THP-1细胞（人源单核细胞系）进行Anti-mouse IgG2aκ Isotype Control (APC)染色，发现未经Fc受体封闭的细胞有明显的假阳性信号（紫线），而Fc受体封闭能够有效的消除这部分信号（蓝线）。灰线代表未封闭也未染色细胞的自发荧光信号。

图4. Fc Receptor Binding Inhibitor Antibody

(货号：14-9161-73) 封闭效果检测图。

所以，Fc受体封闭能够有效的降低由Fc受体导致的背景信号甚至假阳性信号。

如何进行Fc受体封闭？

究其根本，目前常用的Fc受体封闭方法是在流式抗体染色前，添加封闭试剂来与Fc受体结合进行“占位”，从而使得Fc受体丧失结合流式抗体的能力，常见封闭试剂主要包括血清或者血清中纯化的IgG、抗CD16/32的抗体以及重组表达的Fc。这里列出了Invitrogen eBioscience针对不同种属细胞进行Fc受体封闭的产品。

常见问题 FAQ