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蛍光核酸定量における温度管理の重要性

Written by | Published: 07.24.2025

蛍光核酸定量は、DNAやRNAの濃度を高感度かつ正確に測定するための重要な技術です。特に研究や診断の現場では、正確な核酸濃度の測定が求められます。しかし、測定時の温度管理が不十分だと、得られる結果に大きなばらつきが生じることがあります。本ブログでは、蛍光核酸定量における温度の影響について、実際の実験データを基に解紹介します。

実験方法

今回の実験では、Invitrogen™ Qubit™ dsDNA HS Assay Kit（製品番号 Q32851）でDNAサンプルを蛍光測定しました。

実験条件：
・DNAサンプルの濃度：0 ng/μL、4 ng/μL、10 ng/μL
・インキュベーション条件： on ice、室温（21℃）、37℃

各条件で5分インキュベートした後、Invitrogen™ Qubit™ 4 Fluorometerで蛍光強度（RFU）を測定しました。

実験結果

測定結果は以下の通りです。

スタンダード
（室温）		 on ice 室温 37℃
10 ng/μL 23602.66 30995.28 23444.06 19370.94
4 ng/μL – 12288.43 8655.89 7496.94
0 ng/μL 53.08 70.72 48.7 48.7

RFUの変動に注目すると、
・on ice：室温に比べてRFUは約1.3倍
・37℃：室温に比べてRFUは約0.7倍
となりました。低温ではＲＦＵが上昇する一方で、高温ではRFUが低下する傾向が見られました。この結果から、インキュベーション時の温度によって蛍光強度が大きく変動することがわかります。

温度管理の重要性

温度が異なると、同じ濃度のサンプルでも得られるRFUが大きく変わってしまいます。正確な核酸濃度を測定するためには、特にスタンダードとサンプルの温度が同一となるよう一貫した温度管理が重要です。

まとめ

蛍光核酸定量における温度管理の重要性について、お分かりいただけましたでしょうか。温度が異なると同じ濃度のサンプルでも得られるRFUが大きく変動し、正確な濃度測定が困難になります。したがって、一貫した温度管理と標準化が、蛍光核酸定量において正確な結果を得るために不可欠です。
皆さんの実験がより正確で再現性の高いものになるよう、温度管理に十分注意していただければと思います。

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