蛋白质富集技术涵盖多种方法,可基于蛋白序列、抗体表位、翻译后修饰(PTM)或活性结合位点分离细胞蛋白。该技术对分离低丰度蛋白及降低蛋白质组分析样本复杂度至关重要。采用免疫亲和技术(如免疫沉淀)可高效富集特定蛋白或复合物, 或通过PTM特异性亲和结合(如磷酸化蛋白富集)针对翻译后修饰进行定向分离。新型的Thermo Scientific ActivX™ 探针与富集试剂盒能特异性靶向激酶、GTP酶、丝氨酸水解酶等酶类。

  • 全面性——提供多种蛋白质富集策略的试剂与试剂盒。
  • 优化设计——所有试剂与试剂盒旨在最大化蛋白得率并减少非特异性结合。
  • 便捷性——即用型离心柱或磁珠形式实现更快速的蛋白富集。
  • 灵活性——试剂盒适用于培养的哺乳动物细胞或组织样本。
  • 验证可靠——所有产品均经过全面测试,处理后的样本经 Thermo Scientific 质谱仪分析验证

根据应用需求选择合适的蛋白质富集产品

 
 磷酸化蛋白富集试剂盒链霉亲和素IP-MS 试剂盒Protein A/G IP-MS 试剂盒激酶富集试剂盒(含ATP探针)ActivX TAMRA-FP 丝氨酸水解酶探针
典型研究目标发现蛋白质组学靶向蛋白质学靶向蛋白质学发现蛋白质组学发现蛋白质组学
靶标磷酸化蛋白单一/同源蛋白单一/同源蛋白ATP 结合位点活性丝氨酸水解酶
结合/标记机制金属螯合亲和磷酸基团生物素化抗体靶向结合抗体靶向结合生物素化 ATP 类似物结合活性位点赖氨酸TAMRA 标记氟磷酸酯结合活性位点丝氨酸
富集步骤酶解前(蛋白)酶解前(蛋白)酶解前(蛋白)酶解后(肽段)酶解后(肽段)
富集形式IMAC固定化链霉亲和素固定化Protein A/G固定化链霉亲和素固定化抗 TAMRA 单抗
基底珠类型琼脂糖珠磁珠磁珠琼脂糖珠琼脂糖珠
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蛋白质组学自动化磁珠分离技术

磁珠与KingFisher纯化系统可实现免疫沉淀(IP)及其他亲和纯化流程的自动化,为质谱蛋白质组学分析提供高效样本前处理方案。

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核心实验数据

 靶标A431HEK293
靶标抗体组阴性对照组靶标抗体组阴性对照组
序列覆盖率(%)EGFR65%0%16%0%
AKT136%2%68%6%
AKT250%0%82%0%
AKT38%0%62%0%
PTEN16%0%36%0%

使用Thermo Scientific Pierce链霉亲和素磁珠对中低丰度EGFR-AKT通路靶标进行质谱富集分析。 从A431和HEK293细胞系中,使用生物素化抗体对EGFR-AKT通路靶标进行免疫沉淀,通过Pierce链霉亲和素磁珠捕获抗原-抗体复合物。IP洗脱液进行溶液内酶切消化,通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)评估序列覆盖率,并鉴定异构体特异性肽段。

Western blot and MS workflows for targeted capture and analysis of enzymes.

Western blot与质谱联用技术可实现酶的靶向捕获与分析与。该示意图描述了使用 ActivX 探针对激酶、GTP 酶或丝氨酸水解酶进行剖析、捕获和检测的两个并行工作流程。用抑制剂对酶进行预孵育,可以通过探针标记蛋白质的 Western 印迹(或仅针对丝氨酸水解酶的荧光 SDS-PAGE)或探针标记肽的质谱分析来确定抑制剂的特异性、结合亲和力和效力。

 靶标A431HEK293
靶标抗体组阴性对照组靶标抗体组阴性对照组
序列覆盖率(%)EGFR65%0%16%0%
AKT136%2%68%6%
AKT250%0%82%0%
AKT38%0%62%0%
PTEN16%0%36%0%

使用Thermo Scientific Pierce链霉亲和素磁珠对中低丰度EGFR-AKT通路靶标进行质谱富集分析。 从A431和HEK293细胞系中,使用生物素化抗体对EGFR-AKT通路靶标进行免疫沉淀,通过Pierce链霉亲和素磁珠捕获抗原-抗体复合物。IP洗脱液进行溶液内酶切消化,通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)评估序列覆盖率,并鉴定异构体特异性肽段。

Western blot and MS workflows for targeted capture and analysis of enzymes.

Western blot与质谱联用技术可实现酶的靶向捕获与分析与。该示意图描述了使用 ActivX 探针对激酶、GTP 酶或丝氨酸水解酶进行剖析、捕获和检测的两个并行工作流程。用抑制剂对酶进行预孵育,可以通过探针标记蛋白质的 Western 印迹(或仅针对丝氨酸水解酶的荧光 SDS-PAGE)或探针标记肽的质谱分析来确定抑制剂的特异性、结合亲和力和效力。

其他蛋白质富集质谱产品清单

仅供科研使用,不可用于诊断目的。