为您的PCR、qPCR和NGS实验提供高品质引物与定制服务

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在分子生物学研究中，引物是聚合酶链式反应（PCR）、定量PCR（qPCR）以及下一代测序（NGS）等技术的核心工具。无论是基因扩增、突变检测还是高通量测序，引物的设计质量直接影响实验的灵敏度、特异性和可重复性。作为全球生命科学领域的领导者，赛默飞世尔科技（Thermo Fisher Scientific™）致力于为科研人员提供高质量的引物产品及全面的合成服务，助力您在基因研究领域取得突破性成果。

上游引物和下游引物：理解其作用与设计原则

什么是上游引物和下游引物？

在DNA双链结构中，由于核酸聚合酶只能沿5'→3'方向进行合成，因此引物的方向性至关重要。

上游引物（Forward Primer，F）：结合于目标DNA模板的正义链（sense strand），引导新链从5'端向3'端延伸。

下游引物（Reverse Primer，R）：结合于反义链（antisense strand），通常需要互补反向配对以确保正确的退火与扩增。

引物长度一般为18–30个核苷酸，Tm值（熔解温度）应接近且匹配，以保证高效的扩增效率。此外，引物设计还需避免二级结构、自身互补或与其他序列交叉杂交的问题。

上游引物与下游引物的区别？

特征上游引物（Forward Primer）下游引物（Reverse Primer）
结合链结合模板链（3'→5'）结合互补链（5'→3'）
扩增方向沿5'→3'方向延伸沿5'→3'方向延伸（但相对于模板链是反向）
序列对应与目标序列相同与目标序列反向互补
常见命名F-primer, FPR-primer, RP

上游引物和下游引物的关键注意事项：

方向性：下游引物必须设计成反向互补序列，否则无法结合。例如：若目标序列是 5'-ATGCC...-3'，下游引物应为 5'-GGCAT...-3'（反向互补）。

Tm值匹配：上下游引物的熔解温度（Tm）应接近（差异≤5°C），以确保同步退火。

避免二聚体：引物自身或相互之间不应形成引物二聚体（Primer Dimer），否则会竞争PCR反应体系。

3'端稳定性：引物的3'端最后1-2个碱基应为G或C（强结合），提高延伸效率。

赛默飞引物产品与服务：满足多样化科研需求

1. 预设计引物（Pre-designed Primers）

赛默飞提供经过验证的预设计引物，适用于常见基因检测、表达分析和SNP分型。例如：

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2. 定制引物合成（Custom DNA Oligos）

针对特定研究需求，我们提供灵活的定制化引物合成服务，支持多种修饰选项（如荧光标记、磷酸化、硫代磷酸键等），适用于以下应用：

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  • 品质保障：采用先进的固相合成技术，纯度高达HPLC级别，确保实验结果可靠。
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