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扩展实验规模并提高样品处理量

专注于鉴定和验证生物标记物检测的转化研究需要一种高效的 LC-MSⁿ 工作流程解决方案，以扩大实验规模并提高样品通量，同时以更高的特异性进行定量检测。

Thermo Scientific Stellar 质谱仪为大分子和小分子的靶向定量解决方案创造了新的模式，可以获得出色的实验室生产力。

可以前所未有的规模将生物标志物从发现阶段过渡到验证阶段

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"如果我正在开发新的靶向生物标志物检测，我将使用类似的平台，因为它是出色的三重四极杆。"

Brian Searle
副教授
俄亥俄州立大学医疗中心

规模化下出色的定量分析性能，可以自信地在单位时间内定量更多的分析物

从发现到验证以利用靶向定量的转化研究可识别大量推定的生物标记物。为了利用更高的灵敏度和定量准确度，LC-MS/MS 工作流程必须具有快速采集速度和实时数据管理。Stellar 质谱仪利用全扫描 MS² 采集的高速度 (高达 140 Hz) 和自适应 RT 进行动态保留时间调整，确保具有高灵敏度和特异性的可重现检测，以实现完整的样品覆盖。

初始研究从最初在非靶向发现实验中评估的细胞外囊泡中创建了靶向定量。在60分钟内，共复制并精确定量了8,686个胰蛋白酶肽替代物，代表了近2,000种蛋白质。使用 Reactome 通路映射评估定量蛋白，以评估信号转导通路。借助大蛋白集合，可在一次实验中评估多个途径。

"Stellar 质谱仪可以在超出大多数人想象的范围内实现稳健的靶向定量。"

Michael J. MacCoss
基因组科学教授
华盛顿大学

使蛋白质组学大众化：生物液体的高度多重靶向分析

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Stellar MS 通过 60 分钟的梯度扩大了将近9,000种肽的靶向肽定量分析规模。总共检测了7,666个肽，变异系数<20%。

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Fabregat A, et al.Reactome 图表查看器：用于提高性能的数据结构和策略。生物信息学 (英国牛津)。2018 Apr;34(7) 1208-1214. doi: 10.1093/bioinformatics/btx752.PubMed PMID: 29186351.PubMed Central PMCID: PMC6030826.

为了解决不断扩大的实验规模，需要更快的数据采集速度

靶向代谢物定量分析为利用大规模研究规模来确定生物学的转化研究人员带来了挑战。为了提高样本通量，我们使用更快的色谱梯度进行内源性代谢物及其同位素富集标准的定量分析，以提高定量准确性和方法标准化。靶向重/轻对可提高单位时间的目标容量并减少占空比，但可能会影响定量性能。

凭借 Stellar 质谱仪的快速采集速度，它可以提供高质量的定量数据，即使在使用毛细管电泳时，也能提供1秒宽的峰值宽度。结果显示，对124种化合物的定量准确性和精确性在不到2分钟内覆盖了广泛的浓度范围（1-500 µM），并与 NIST 参考标准高度一致。

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克服非耗竭血浆蛋白组学分析中生物标记物定量分析的挑战

在色谱柱上 0.003 至 100 fmol 的稀释系列中将 PQ500 肽参考试剂盒加标至未去除的血浆酶切物中。为799个重标记肽和相应的内源性（轻）肽创建靶向 MS2 扫描事件。Stellar 质谱仪在 96.6% 的重标记肽上实现了精确定量 (CV ≤ 20%) ，其中中位 CV 为 4.72% ，而前一出版物则显示出 97.9% 的重标记肽的精确定量结果，其中 CV 为 6.1% ，使用2倍长的梯度，而仅靶向重标记肽。

线性定量曲线显示加标范围内重到轻的面积值比率的准确性。插图显示了重型（蓝色）肽和轻型（红色）肽tMS2 结果在 1 fmol 加样水平上的 XIC 比较。尽管强度较低且峰宽较窄，但仍为两种肽类似物获取了 7 个数据点，从而获得肽 ELLDTVAPQK 在色谱柱上的可靠定量，定量下限约为 0.033 fmol柱上量。

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具有稳健、可靠的单细胞灵敏度水平的定量功能

在 Stellar 质谱仪上进行的靶向蛋白质定量可以将定量灵敏度提高到 zmol 水平，并提高样品通量。

Stellar 质谱仪可执行快速的 tMS2 采集，以扩展靶向肽列表，涵盖可能对细胞开发或其他关键生物功能至关重要的300多种蛋白。

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Sting 函数关联网络搜索 PUF60 网络和介绍性实验的相应覆盖范围，以红色圆圈表示。

提高选择性和特异性，以扩展定量动态范围

磷酸化蛋白代表了关键细胞通路功能的信号节点，分析这些功能以确定生物反应或扰动。磷蛋白中位点特异性磷酸化的靶向定量可以根据占用率来测量活性。

即使使用 IMAC 或 TiO2 富集，靶向磷酸肽与基质肽的相对丰度也会影响 tMS2 采集的定量有效性。Stellar 质谱仪可以利用 PRM Conductor 软件智能设计 tMS3 采集方法，以令人难以置信的灵敏度采集快速同步前体离子选择 MS³ (SPS MS³) 数据，从而提高了靶向磷酸肽实验的价值。

在用于磷酸化蛋白组学研究的新型二合一低分辨质谱仪上对发现规模的平行反应监测扫描进行评估

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平台多功能性可以快速创建代谢物定量的方法

小分子方法优化通常需要测定每个分析物的关键 MS 参数以实现灵敏和特异性的数据采集。这很耗时，并且可能会受到一种碎裂机理的限制。

Stellar 质谱仪的快速极性切换和 MSⁿ 采集速度可在一个或两个 LC-MSⁿ 实验中进行完整的分析物表征，而非耗时的数小时或数天。采集 HCD 模式碎片和共振 CID 模式碎片离子可以产生替代定量策略，省去使用更少特异性的SIM 定量的需要。经验证的串联 MS 质谱图也可以从 Thermo Scientific mzCloud 质谱库导入以进行确认。