荧光微孔板检测

荧光微孔板检测优化指南

1. 选择最合适的荧光激发和发射滤光片（波长）。激发和发射波长数据已包含在产品手册和/或快速浏览卡片中。检测试剂与仪器之间的光谱匹配度较差时，会导致大量信号丢失。
2. 调整仪器灵敏度设置以最大限度增强荧光信号。要达到最大的线性动态范围，需选择最高增益或灵敏度设置以同时适于预期检测值的最低值和最高值。
3. 实验使用同样的检测体积。检测体积的微小差别也会导致信号的极大差别。为得到可靠的测量结果，请确保使用仪器制造商所推荐的最小体积或更大体积的产品。
4. 完全彻底地混匀样品。混匀不充分将会导致聚集、沉淀，并引起反应速率不同或分析物和检测试剂的孔间浓度差异。
5. 一定要避免产生气泡。检测溶液中的气泡会导致光散射和错误信号。可以对微孔板进行短暂离心，或在配制溶液前进行脱气处理（不适用于活细胞检测），还可以使用移液器吸头来吸出较大的气泡。
6. 制备重复样品。重复分析可以提高检测的精确度。
7. 避免“边缘效应”。含有合适荧光基团的溶液可用于确定微孔板所有板孔获得的荧光信号间的一致性。若在微孔板边缘板孔中发现了信号差异，可以引入合适的校正因子或不再使用这些板孔。
8. 隔离明亮样品。在透明微孔板中，含有强荧光的样品会影响到邻近板孔中测量的信号（又叫孔间串扰）。可以在强荧光样品周围留下空的或空白对照的孔，或在邻近板孔中加入具有相似荧光强度的样品。还可以使用白色或黑色的微孔板代替透明平板。
   
9. 避免样品发生光漂白。不到万不得已，绝对不要重复检测同一个样品。也不要重复检测标准品，因为在荧光检测过程中某些试剂可能会发生严重的光漂白。
10. 样品浓度需要在检测范围内。对于未知样品，可尝试不同的稀释倍数。