荧光光谱查看器是一个免费的在线工具，可帮助您实现：

  • 评估染料和探针的光谱兼容性。
  • 设计和优化基于荧光方法的实验，用于成像、流式细胞仪或酶标仪分析。
  • 对光谱重叠进行定量，并确定如何调整可以减少光谱重叠。
  • 保存、共享、导出或打印实验方案。
     

即刻使用 SpectraViewer

使用荧光光谱查看器（SpectraViewer）的5个步骤

无论您是使用成像系统、流式细胞仪还是酶标仪，均可通过以下5步简单操作，使用SpectraViewer 轻松设计您的荧光实验方案。SpectraViewer 可以满足不同的实验复杂性需求，并助您获得高质量的结果。
 

步骤1 - 设置仪器配置

(A) 预加载的仪器配置 - 仪器配置已预加载至SpectraViewer中。获取这些配置，可以通过选择右上角的 Options（选项）、打开Load（加载），并选择仪器预设配置。此外，保存的配置将显示在Load（加载）文件夹中。

(B) 手动配置 - 如果没有可用的仪器配置，可手动输入Light Sources（光源）、Excitation and Emission filters（激发滤光片和发射滤光片）。对于Light Sources（光源），选择Laser（激光）或Lamp（灯），然后从下拉列表中选择，或选择自定义、添加波长和名称。

(C) 显示 - 图表中显示Laser（激光）和 Emission Filters（发射滤光片）选择。选择后，激光激发会显示在图上。

(D) 光源 - 可以使用Light Source（光源）选项卡添加一个灯，而不是激光。选择了光源后，从下拉菜单中选择激发滤光片和发射滤光片。

(E) 保存配置 - 如果需要，可以保存输入的配置。选择右上角的 Options（选项），从下拉菜单中选择 Save（保存），命名您的配置，然后保存。可以使用Options （选项）选项卡中的Load（加载）功能来查看保存的配置。

步骤2 - 选择荧光基团

(A) 添加荧光基团 - 按下Add（添加）荧光基团按钮，然后输入荧光基团的名称。继续输入染料或探针的名称，以缩短列表或滚动显示的列表。选择染料或探针后，它会显示在图上。选择右侧图上的Ex（激发）、Em（发射）和Display（显示），可以控制要清除或显示在图上的光谱数据。位于荧光基团左侧的数字显示了添加到SpectraViewer中的荧光基团数量。

(B) 添加更多荧光基团 - 如需继续选择更多荧光基团，可点击位于界面右下方的 Add new fluorophore 按钮继续添加。

步骤3 - 分析和调整

(A) 选择激光来归一化光谱 - 在Light Source（光源功能）下，选择Laser（激光）来归一化光谱。如需将光谱归一化至特定的激光，请单击Normalize（归一化）一栏下的圆圈。如果没有选择激光来归一化光谱，并且所有发射光谱被调整为100%“相对强度”。使用激光名称左侧的Show（显示）图标打开和关闭图中的激光。

(B)实验设计的初步分析 - 将指针悬停在图表区上方，就会显示一条垂直白线。这条线将显示选定的波长（在白线的顶部或图表的左下角）。白色圆圈用作视觉提示，对应于图表中显示的各个荧光基团的激发和发射百分比。

步骤4 - 使用Spillover Table（溢出表）进行深入分析和调整

(A) 溢出表 - Spillover Table（溢出表）显示潜在的光谱重叠问题，您可以通过它优化实验设计。每个被选作Light Sources（光源）的Lasers（激光）显示为标签，图表中使用的所有荧光基团在左侧显示。Fluorophores（荧光基团）旁边是用于收集发射信号的Channel（通道）。从下拉菜单中选择用于每个荧光基团的Channel（通道）。

(B) 调整光谱重叠 - 在Spillover Table（溢出表）中，灰色方框是使用特定激光和发射滤光片或通道从目标荧光基团捕获的发射百分比。

灰色框以外是溢出值或光谱重叠值。在示例中，如果目标荧光团是Alexa Fluor 488，使用Blue Laser（蓝色激光）和GFP通道，52.8%的Alexa Fluor 488发射光谱被捕获。 水平方向查看该表，并使用Blue Laser（蓝色激光）和GFP通道或发射滤光片，来自GFP荧光团的荧光发射也与Alexa Fluor 488一起被捕获。在这个示例中，GFP信号是Alexa Fluor 488信号（这个通道的目标）的76.1%。

此外，当以垂直方向查看该表时，显示出与该行的目标荧光基团重叠的Alexa Fluor 488光谱量。在下面的示例中，使用RFP发射滤光片的Alexa Fluor 488发射信号的量从Blue Laser（蓝色激光）捕获。当使用Blue Laser（蓝色激光）和RFP发射滤光片时，捕获的Alexa Fluor 488信号的量是预期的或Alexa Fluor 555信号的40.5%。

对所用荧光基团的调整可以在Spillover Table（溢出表）中进行，这将带来Chart（图表）中的更改，从而能以简单直观的方式确认所做调整。
 

步骤5 - 辅助功能

(A) 缩放 - 将鼠标悬停在chart （图表）上，直到出现白线，即可使用 Zoom Function（缩放功能）进行缩放详细分析。单击并按住鼠标左键，在图表中移动以高亮显示感兴趣的区域，然后松开鼠标按钮。

高亮的区域将被扩展。如需重置缩放，请单击图表左上角的按钮。
 

(B) 荧光基团或激光的分离 - 使用多个相邻或重叠的激发光谱和发射光谱的荧光实验会导致额外的复杂性。为了实现使用相邻或重叠的光谱进行实验设计，荧光光谱查看器上增加了一项新功能。SpectraViewer能够将荧光团或激光分离到单个图中。

如需使用Fluorophore（荧光团）或Laser Separation（激光分离）功能，请单击图表右上角的View full screen（查看全屏）。

Absorption and emission spectrum

进入全屏后，选择左上角的View（查看）按钮进入下拉菜单，然后选择Separate lasers（分离激光）或Separate fluorophores（分离荧光基团）。选择Separate fluorophores（分离荧光基团）将使得每个荧光基团在单个图上被分离（见下文）。

Absorption and emission spectrum

如需返回正常视图，进入View（视图）下拉菜单，并选择Default （默认）视图。如需返回初始屏幕，即包括荧光基团和仪器配置的界面，选择Exit（退出），退出全屏。

(C) 重置 - 退出时，将保存最后一版SpectraViewer设置。然而，如果您选择重置应用程序以重新开始，请选择重置按钮，并选择是否清除Fluorophores（荧光基团）或清除Instrument Configuration（仪器配置），或两者都清除。将会出现一个正在重置图表的提示。

(D)设置 - 单击以打开和显示网格线、标签、激发图、发射图、光源、滤光片，或者可以打开或关闭图归一化。如需从显示中清除某一个激发图或发射图，请使用每个配置元素右侧的选择功能。

(E) 全屏查看 - 展开图表以扩展至整个屏幕。使用位于图表右上角的Exit Full Screen（退出全屏按钮）退出全屏。如后面所述，Full Screen（全屏）也可用于分离荧光基团或激光设置，以进行详细分析。

(F) 扩展菜单 - 扩展Light Source/Excitation Filter/Emission Filter（光源/激发滤光片/发射滤光片）菜单，以实现多种设置的可见性。

(G) 保存并选择产品 - 通过单击Save（保存）按钮并指定一个独有的名称，可以保存SpectraViewer设置。可以使用Load（加载）功能（如第A节所述）来加载该图。通过点击Select Products（选择产品）选项卡，可以查看用于生成当前SpectraViewer图的产品。注意：配置被保存在您浏览器的高速缓冲存储中，因此在其他浏览器或其他电脑上不可用。如果删除浏览器的高速缓冲存储，您的配置也将被删除。

如果您正进行流式细胞术实验，推荐使用panel builder配色工具
 

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