细胞活性/周期/凋亡-流式及成像试剂大集合

主题一：细胞活性检测

可固定细胞活性流式试剂

从数据中排除死细胞可以使免疫细胞分群更为准确，如下图数据可见排除死细胞后，阳性细胞分群更明确。Invitrogen Molecular Probes LIVE/DEAD 可固定死细胞染色剂是一种有助于确认在细胞固定后对活性进行准确评估的可固定活性染料。

如左图若设门活细胞（图上蓝色细胞群，可明确区分出有表达因子的细胞群。若不把死细胞去除（图上红色细胞群）则无法明确

• 灵活 — 三种包装规格，八个单通道荧光色，灵活满足实验的需求
• 特异 — 活细胞和死细胞可被清晰的区分，即便是在固定后也可轻松排除影响结果准确性的死细胞
• 简便性 — 兼容大部分流式抗体染料及免疫分型方案

不可固定细胞活性流式试剂

Invitrogen SYTOX死细胞染色剂无法穿透完整的细胞膜且在与dsDNA结合后具有更强的荧光信号，因而成为我们最出色的死细胞染色剂（图 1）。 SYTOX死细胞染色剂在水相介质中不发荧光，因此在使用时仅需直接加入细胞中便可进行观察，并不需要洗涤步骤，但不能用于固定后细胞染色。该系列染色剂可提供多种颜色形式并兼容多种激光，具有高度灵活性。

固定细胞活性显微成像试剂

通过细胞成像方法也可以简单直观的区分死活细胞，评估单个细胞或细胞群的活性，可对培养的细胞、3D球状体、精子、细菌、酵母等进行检测。

图示：LIVE/DEAD Cell Imaging Kit (R37601) 标记HeLa 3D培养球状体中活细胞(绿色)和死细胞(红色)的结果图 (A) 无处理对照 (B) 用100 nM niclosamide预处理后 (C) 用10 μM niclosamide预处理后。

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主题二：细胞周期检测

细胞周期检测对于监控不正常生长的癌细胞是重要的指标，也同时代表了细胞发育的调节分化的进展。我们提供了一系列的荧光染料，供您对活细胞或固定细胞群进行G0/G1期细胞与S期、G2期或多倍体细胞的周期分析。

细胞周期分析

G0：细胞阻留时期

G1：合成前期,大量酶生成

S：DNA开始复制

G2：有丝分裂准备期，大量蛋白生成

M：有丝分裂期

活细胞周期流式检测试剂-染色后的细胞可以分选继续培养或在染色后进行功能测定

固定细胞周期流式检测试剂-染色剂用于流式细胞术固定后非活细胞

活细胞周期显微成像检测试剂-动态观察细胞周期和细胞分裂

Premo™ FUCCI细胞周期指示剂是一种双色荧光传感器，用以观察活细胞中细胞周期过程和细胞分裂，可通过荧光显微镜、流式细胞仪或高内涵成像对单个细胞或一群细胞进行精确和灵敏的细胞周期分析，兼容固定和透化。两种指示剂geminin–GFP 和 Cdt1–RFP两相循环，呈现从红色（G1期）到黄色（G1/S期）再到绿色（G2/M期）的动态颜色变化（如左图）。

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主题三：细胞凋亡

细胞凋亡（细胞程序性死亡）是细胞正常发育过程中，由遗传控制的细胞消亡现象。细胞死亡的有序进程对于多细胞生物而言至关重要。凋亡—由遗传因素控制的去除细胞的过程—不仅可为生物体去除其不重要的细胞和组织，确保生物体正常生长和发育，还能通过破坏免疫系统中多余的细胞以及被病毒感染或者DNA 受损的细胞，从而减小对生物体的损害。凋亡调控异常与许多疾病状态有关，例如阿尔茨海默病、 中风以及癌症。

区别千损伤导致的细胞死亡（坏死），凋亡细胞的形态学特征为核染色质固缩、 细胞皱缩以及产生膜结合凋亡 小体，以及出现DNA 片段化和—些细胞蛋白的解离或降解。通过荧光探针，我们可以选择性的显示这些差异。 与细胞活性—样，无法通过任何单—指标来准确界定细胞彻底死亡，也没有单—的实验方法能够完全的显示凋亡，因此， 在研究凋亡事件及其时间关系时最好采用多参数的方法。

• 线粒体膜电位/线粒体转换孔开放

  • 线粒体膜电位/线粒体转换孔开放

    细胞凋亡早期阶段的显著特征是线粒体的破裂，包括膜电位和氧化-还原电位的改变。

    底下表格列出了不同方法与各种荧光染料通道的相关试剂。

    	线粒体健康分析						线粒体膜电位分析
    	显微镜成像					流式	流式	显微成像
    	MitoSOX™ Red线粒体超氧化物指示剂	Rhod-2 AM (钙离子指示剂)	Image-iT™ LIVE 线粒体转换孔检测试剂盒			线粒体通透性转换孔分析	JC-1	JC-1	TMRE	MitoTracker™ Orange
    指示剂	MitoSOX™ Red	Rhod-2 AM	Hoechst 33342	Calcein	MitoTracker Red CMXRos	Calcein AM	JC-1	JC-1	TMRM	MitoTracker Orange
    检测通道	RFP/TRITC	TRITC	DAPI	FITC	TRITC	FITC	FITC	TRITC	TRITC	TRITC
    Ex/Em (nm)	510/580	552/577	350/461	494/517	579/599	494/517	515/529	514/529	552/576	550/580
    规格	10 x 50 µg	20 x 50 µg	1 kit (1,000 slides)			100 反应	5 mg	5 mg	25 mg	20 x 50 μg
    货号	M36008	R1245MP	I35103			M34153	65-0851-38	T3168	T669	M7510

• 磷脂酰丝氨酸外翻

  • 磷脂酰丝氨酸外翻

    Annexin V染色方法是最常用于流式细胞术检测细胞凋亡中期。在正常活细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）位于细胞膜的细胞质表面。凋亡的中间，PS会从膜的内侧翻转到外侧，暴露于细胞外环境，可被检测到。强荧光Annexin V偶联物可为研究磷脂酰丝氨酸外化提供快速、可靠的检测方法。

    Annexin V 荧光通道	包含的坏死染料	包装/反应次数	货号
    eFluor 450	7AAD	50	88-8006-72
    		200	88-8006-74
    Pacific Blue	SYTOX AADvanced	50	A35136
    Alexa Fluor 488	PI	50	V13241
    		250	V13245
    Alexa Fluor 488	SYTOX Green	50	V13240
    FITC	PI	50	88-8005-72
    		200	88-8005-74
    PerCP-eFluor 710	不含	50	88-8008-72
    		200	88-8008-74
    PE	SYTOX Green	50	V35112
    	7AAD	50	88-8102-72
    		200	88-8102-74
    PE-Cyanine7	不含	50	88-8103-72
    APC	SYTOX Green	50	V35114
    	PI	50	88-8007-72
    		200	88-8007-74

• Caspase 活性检测

  • Caspase 活性检测

    Caspase酶激活是细胞凋亡早期的一个显著特征。该过程参与了蛋白质底物的剪切及后续的细胞分解。我们可提供一系列caspase活性分析工具，能轻松实时监测或瞬时捕捉到活细胞中的活化caspase。

    

    CellEvent™ Caspase-3/7 Green/Red 成像检测试剂特点

    • 优化的 caspase-3/7 底物用于细胞凋亡分析
    • 简单且无需清洗步骤有助于保护易损的凋亡细胞
    • 适用于活细胞荧光成像和甲醛固定的方法

    	CellEvent™ Caspase-3/7 Green 检测试剂				Image-iT™ LIVE Red Detection Kits		Image-iT LIVE Green Detection Kits
    	流式	显微镜成像			显微镜成像
    检测原理	免洗，可连续检测caspase活性，荧光强度随活性增加而增强				洗涤后检测caspase活性标记信号，可区分凋亡细胞、活细胞和死细胞
    靶向的Caspase	Caspase-3/7				Poly-caspase	Caspase-3/7	Poly-caspase	Caspase-3/7
    推荐检测通道	FITC	FITC			TRITC		FITC
    Em/Ex (nm)	502/530	502/530			550/595		488/530
    核染料	SYTOX® AADvanced	不含			Hoechst 33342 SYTOX Green		Hoechst 33342 PI
    样本	活细胞染色且可兼容固定
    规格	100 反应	100 µl	25 µl	1 Kit	1 Kit
    货号	C10427	C10423	C10723	R37111	I35101	I35102	I35104	I35106

• 核染色质凝聚

  • 核染色质凝聚

    处于凋亡中的细胞表现出细胞核染色质凝聚的增强。 随着染色质的凝聚，细胞可渗透核酸染料发出超亮荧光，使得结合传统的死亡细胞染色就可以确认凋亡细胞。

    货号	名称	激光	激发/发射光波长	应用
    H1399	Hoechst 33342	UV	350/461	流式
    V35003	Vybrant DyeCycle™ Violet	405	369/437
    Y3603	YO-PRO-1碘化物	488	491/509
    R37605	NucBlue™ Live ReadyProbes™即用型滴瓶装	UV	360/460	成像
    R37106	NucRed™ Live 647 ReadyProbes™即用型滴瓶装	640	638/686
    R37606	NucBlue™ Fixed Cell ReadyProbes™ 即用型滴瓶装	UV	360/460

    

    HeLa细胞荧光成像图片，采用NucBlue™ Fixed Cell ReadyProbes™ 即用型试剂染核。
• DNA片段化

  • DNA片段化

    细胞凋亡时出现的DNA片段化会产生DNA链断裂，推荐使用TUNEL技术 (末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记) 标记断裂的DNA片段，进行分析。

    Invitrogen™ Click-iT™ TUNEL 显微成像试剂盒

    分析试剂可标记DNA断裂检测细胞凋亡。与其他传统使用修饰核苷酸的检测方法相比，Click-iT TUNEL方法能够检测到更高比例的凋亡细胞。Click-iT 采用“点击化学”技术，通过使用叠氮和炔基两步小分子快速反应进行标记，可用于TUNEL 凋亡检测、细胞增殖、RNA合成、新蛋白合成、脂质过氧化反应等多种检测。

    Click-iT TUNEL 技术优势：

    • 可高效准确检测晚期凋亡阶段
    • 可与其他荧光标记进行多重分析检测
    • 灵敏度更高，标记基团小渗透性更好
    • 快速检测低至2小时内可完成

    货号	名称	包装	应用
    C10245	Click-iT TUNEL Alexa Fluor 488 Imaging Assay	1 kit	成像&HCS
    C10246	Click-iT TUNEL Alexa Fluor 594 Imaging Assay	1 kit
    C10247	Click-iT TUNEL Alexa Fluor 647 Imaging Assay	1 kit
    C10617	Click-iT Plus TUNEL for in situ apoptosis detection, Alexa Fluor 488 dye	50 assays
    C10618	Click-iT Plus TUNEL for in situ apoptosis detection, Alexa Fluor 594 dye	50 assays
    C10619	Click-iT Plus TUNEL for in situ apoptosis detection, Alexa Fluor 647 dye	50 assays
    C10625	Click-iT TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit	50 assays	IHC

    

    利用Click-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 647 染料（C10619）标记，对小鼠肠FFPE切片中表达GFP的上皮细胞进行凋亡染色。

    APO™-BrdU TUNEL 流式试剂盒

    该试剂盒包含标记和探测凋亡细胞 DNA 链断裂所需的所有材料。 DNA 链被核酸酶切割或产生切口时，大量 3’ 羟基端暴露出来。 在 APO-BrdU 分析中，通过 TUNEL 技术用 BrdUTP 和末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 标记这些末端。 待其掺入 DNA 后，即可用明亮和光稳定的绿色荧光 Alexa Fluor® 488 染料标记的抗 -BrdU 抗体检测 BrdU。

    货号	名称	激光	激发/发射光波长	应用
    A23210	APO-BrdU™ TUNEL Assay Kit, with Alexa Fluor™ 488 Anti-BrdU	488	495/519	流式