内容总结：

  1. PSCs应用及常见工作流程
  2. 高效和安全的重编程方法：当前各种重编程方法汇总，Cytotune 2.0介绍
  3. PSCs培养的最佳体系选择：目前常见培养体系汇总， KSR-MS以及Essential 8培养基介绍
  4. PSCs鉴定和分化：提供性能可靠和使用便捷的产品及解决方案
  5. 资源和工具

演讲者：何静 博士——赛默飞生命科学产品与服务集团技术支持专家

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 干细胞与再生医学研究人员、分子与细胞生物学实验人员

[00:00-03:00] 开场和流程介绍: 背景概述及常见流程

[03:00-06:00] 重编程考虑和方法: 细胞来源及方法选择

[06:00-09:00] 病毒重编程方法: 整合型和非整合型

[09:00-12:00] 细胞来源选择方法: 获取难易及效率

[12:00-15:00] 病毒体系介绍: 仙台病毒特点及安全

[15:00-18:00] 试剂盒使用流程: 2.0版本特点和操作

[18:00-21:00] 培养体系选择: 饲养层和无饲养

[21:00-24:00] 血清替代使用方法: KSR优势及注意事项

[24:00-27:00] 无异种培养方法: Essential 8基和基质

[27:00-30:00] 灵活培养流程: E8 Flex节省和安排

[30:00-33:00] 传代和复苏方法: 存活添加剂及切换

[33:00-37:00] 鉴定与编辑流程: 标记检测及CRISPR方法

学习目标：

  1. 掌握iPSC重编程的体细胞选择和方法优劣
  2. 理解仙台病毒非整合重编程的安全性和效率
  3. 学习KSR与Essential 8在培养中的应用与切换流程
  4. 掌握多能性鉴定标记及免疫荧光检测方法
  5. 理解CRISPR蛋白电转在iPSC中的操作与注意事项

基础概念：

  1. iPSC（诱导多能干细胞）: 体细胞通过重编程获得的具自我更新和三胚层分化能力的细胞
  2. 仙台病毒（Sendai virus）: RNA病毒，细胞质复制，非整合型，用于安全高效的重编程
  3. KSR（KnockOut Serum Replacement）: 成分确定的血清替代物，降低批次差异并抑制非期望分化
  4. Essential 8培养基: 无异种成分、成分明确的PSC培养基，去除不稳定组分
  5. E8 Flex: 优化版Essential 8，提高生长因子稳定性，支持更灵活换液与传代
  6. CRISPR蛋白电转: 以RNP形式通过电转导入Cas9与sgRNA，提升编辑效率并降脱靶
  7. CD34+造血细胞: 表达CD34的造血祖细胞，常用作iPSC重编程起始细胞
  8. MOI（感染复数）: 病毒颗粒与细胞比例，影响转导效率与细胞毒性