RNAi 研究整体解决方案及应用

内容总结：

1. 技术介绍
2. Ambion® RNAi整体解决方案
3. 在各研究领域的应用及案例分享

演讲者：刘慧丽——赛默飞生命科学产品技术应用专家

类型：技术讲座

难度：中级

目标受众：生命科学研究人员、药物研发人员、分子与细胞生物学实验人员

[00:00-02:59] 机制介绍: 命名由来及关键时间

[03:00-05:59] 机制方法: 生物发生及配对差异

[06:00-08:59] 产品方案: 模拟物和抑制剂原理及修饰

[09:00-11:59] 实验要点: 避免污染和对照设置

[12:00-14:59] 设计方法: 效率阈值及脱靶来源

[15:00-17:59] 产品对比: 标准与高级siRNA对比

[18:00-20:59] 优化方法: 五重过滤和双链修饰

[21:00-23:59] 体内要点: 设计要求和稳定性指标

[24:00-26:59] 数据解读: 持效时间和血清毒性

[27:00-29:59] 递送流程: 2.0混合孵育及透析注射

[30:00-32:59] 工具方案: 提取、逆转录及定量

[33:00-35:20] 案例分享: 筛选结果及联系方式

学习目标：

1. 掌握RNA干扰的历史与关键里程碑
2. 理解miRNA与siRNA的生物发生和作用差异
3. 学习体外siRNA实验的对照设置和效率标准
4. 掌握siRNA脱靶来源及优化设计方法
5. 了解体内递送试剂2.0/3.0的使用流程和注意事项

基础概念：

1. RNA干扰: 由双链RNA触发的基因沉默现象，导致mRNA降解或翻译抑制。
2. miRNA: 内源性小RNA，经pri/pre加工成单链，部分配对抑制目标基因。
3. siRNA: 合成双链21bp小RNA，完全互补配对引导mRNA降解。
4. RISC复合物: 与小RNA结合的蛋白复合物，识别靶mRNA并介导沉默。
5. 种子序列: siRNA第2-8位区段，易与非靶mRNA部分配对引发脱靶。
6. 转染对照: 未处理、阴性、荧光和阳性/通路对照，用于评估毒性与效率。
7. 体内递送试剂2.0/3.0: 纳米脂质体系，经混合孵育（2.0含透析，3.0免透析）实现尾静脉注射。
8. 免疫原性: 体内制剂诱发免疫反应的能力，需评估血清学指标。