亚克隆用 TOPO™ TA Cloning™ 试剂盒可提供高效、5 分钟的一步克隆策略（“TOPO™ 克隆”），用于将 Taq 聚合酶–扩增 PCR 产物直接插入一个质粒载体上以进行亚克隆。每个试剂盒使用含便利限制性位点的 pCR™ 2.1-TOPO™ TA 载体进行亚克隆。根据您的需要和预算，您可选择含多种感受态细胞或不含感受态细胞的克隆试剂盒。用于亚克隆的 TOPO™ TA 克隆™试剂盒的特点：

•快速且简便—从 PCR 至克隆仅需3步，手动操作时间短至5分钟
• 高效—可获得高达 95% 含正确插入片段的克隆
• 久经考验—在过去十余年中性能可靠，引用次数超过4,000次
• 简单—不需要连接酶、PCR 后程序或含有特异性序列的 PCR 引物

用于亚克隆的 TOPO™ TA Cloning™ 试剂盒—概述

• 载体：pCR™ 2.1-TOPO™ TA 载体—含15个便利限制性位点（位于您插入片段侧翼）的亚克隆载体，可轻松实现定向亚克隆
• 克隆方法：TOPO™ TA Cloning™ —含 3′-A 突出端（Taq 聚合酶扩增）的 PCR 产物与含 T 突出端的 TOPO™ 载体基于拓扑异构酶 I 进行5分钟连接–
• 感受态细胞：多种选项—从包含一般、高效、噬菌体 T1 抗性或快速生长型感受态细胞的试剂盒中选择或使用您的自有细胞–

pCR™ 2.1-TOPO™ TA 载体—简化克隆和亚克隆
pCR™ 2.1-TOPO™ TA 载体使用 3'-胸苷 (T) 突出端进行线性化以直接连接 Taq 聚合酶–扩增 PCR 产物 (TA cloning™)，并使用共价结合拓扑异构酶 I 进行“活化”。无需添加连接酶，在5分钟内即可完成克隆。位于 PCR 产物插入位点侧翼的 EcoRI 位点，可实现插入片段的简便切除或使用任何位于 PCR 插入片段侧翼的 15 个便利限制性位点的任意组合，可轻松实现定向亚克隆。

pCR™ 2.1-TOPO™ TA 克隆选择和操作
pCR™ 2.1-TOPO™ TA 载体包含氨苄青霉素和卡那霉素抗性标记物以及用于蓝/白斑筛选的 LacZα 基因。

简化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO™ 克隆技术，无需使用含有特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。只需将 PCR 反应产物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中，孵育 5 分钟，并使用大肠杆菌感受态细胞进行转化。

高效克隆
携带所需插入片段的克隆高达 95%，您可以筛选更少的克隆体，从而节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™ 2.1-TOPO™ TA 载体含有 3'-T 突出端，用于高效连接含 3'-A 突出端的 Taq 聚合酶–扩增 PCR 产物。

克隆标准
在克隆方面，TOPO™ 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO ™克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。

用于亚克隆的TOPO™ TA 克隆™试剂盒—试剂盒选项
根据您的需求，测序用 TOPO™ TA 克隆™试剂盒可与提供不同优势的多种感受态细胞一起购买：

• 一般克隆：TOP10 细胞（货号K4500-01、K4500-40）
•高效克隆：TOP10 Electrocomp™ 细胞（货号号 K4560-01、K4560-40）
• 一般克隆，噬菌体 T1 抗性：DH5α-T1R 细胞（货号 K4520-01、K4520-40）
• 快速生长：Mach1™ -T1R 化学感受态大肠杆菌（货号 K4510-20）
• 自行提供：灵活性高且可节省成本（货号 450641）

我们还提供2个版本的试剂盒，包括 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒（货号 K4500-02 和 K4510-02）用于分离清洁、已完成测序的重组质粒。