Cellfectin™ II 试剂

有多种可能原因：

•转染所用培养基含有抗生素。
•细胞接种密度过低：我们建议细胞汇合度至少达到70%。
•所用细胞代数过低：我们建议细胞用于转染前，至少生长5代。
•转染后未使用青霉素/链霉素，导致污染：加入转染混合物孵育5-8小时后，移除混合物，并在每孔中加入含有抗生素的培养基。

这可能是因为来自杆粒制备的污染或细胞毒性。应设置无Cellfectin II试剂的杆粒阴性对照组。此外，在制备杆粒时，应使用PureLink HiPure质粒制备试剂盒，而不是基于硅胶的小量提取试剂盒。

可以，我们所有的脂质体转染试剂均能够在室温下稳定保存数月。

在正向转染过程中，细胞铺于培养孔之中，用通常的方式制备转染复合物并在第二天将其加入细胞培养物中。在反向转染过程中，在培养孔之中制备转染复合物，之后再加入细胞与培养基。反向转染比正向转染过程更迅速，因此是高通量转染的理想之选。在非高通量的转染操作中，通常正向转染对于大多数类型的细胞转染效果更佳。

可以，转染过程中可在培养基中添加抗生素（青霉素-链霉素）。我们对多个细胞系在含与不含抗生素的培养基中的转染效果进行了比较，同时评估其转染效率和细胞毒性，结果显示并无差别。不过，某些细胞类型对转染过程敏感或可能出现细胞毒性方面的问题，此时省略抗生素可能会有助于改善结果。对稳定转染而言，转染操作后至少等待48小时以上，再加入选择性抗生素。