CELLection™ 生物素结合剂试剂盒

在培养中细胞是否会内吞Dynabeads磁珠要视具体细胞类型而定。由于磁珠尺寸的关系（通常直径为4.5 μM），Dynabeads磁珠将不会通过内吞途径（例如通过网格蛋白有被小窝）发生细胞内化。网格蛋白有被小窝在尺寸上一般不会大于500 nm，这对于磁珠的内吞来说太小了。不过，如果细胞具有吞噬活性（如单核细胞/巨噬细胞），Dynabeads磁珠还是可能在这些特定类型的细胞中被吞噬进入吞噬溶酶体的。所以您问题的答案可能为是或否——视具体的细胞类型而定。

我们提供了多种不含释放机制的Dynabeads磁珠，这些产品可用于细胞阳性分离（捕获靶标细胞）或去除操作（将靶标细胞从样本中去除）：

•适用于细胞去除操作的Dynabeads磁珠：通过Dynabeads磁珠进行的细胞清除是一种十分快速、高效和方便的技术。选用预先包被的Dynabeads磁珠，或使用您的自备靶标抗体来包被我们的二抗包被磁珠，将其加入样本（如全血、PBMC、白细胞层，组织消化产物），混匀并孵育20分钟，再置于磁力架2分钟，您就完成了细胞去除操作。
•适用于阳性分离操作的Dynabeads磁珠，可匹配分子水平的下游分析应用：不含磁珠释放机制的靶细胞阳性分离可用于DNA、RNA或蛋白分析等分子水平的下游研究。在这些应用中，当磁珠连着细胞时，可对分离的细胞进行裂解，当细胞裂解后，磁珠可被移除。如果体系中存在磁珠不是问题，您也可在磁珠存在的条件下培养细胞。在大多数情况下，2-3天后表面的抗原会发生内化，磁珠也会随之脱落——因为这些磁珠相对体积过大，而无法通过细胞内吞途径来实现内化。

在通常情况下，Dynabeads磁珠的尺寸很大，不会发生细胞内吞的现象。网格蛋白有被小窝通常不会大于500 nm，这对Dynabeads磁珠的内吞作用来说太小了。不过，对于像单核细胞/巨噬细胞等具有吞噬活性的靶细胞而言，Dynabeads磁珠还可能由吞噬作用介导进入细胞内部。

CELLection试剂盒中包含了经DNA接头包被（可通过链霉亲和素或抗体用于细胞分离）的Dynabeads磁珠，和一款用于释放磁珠的DNA酶。在使用磁珠（直接或间接地）捕获靶标细胞后，可通过DNA酶的处理来剪切DNA接头，以释放细胞。其结果是，靶细胞从Dynabeads磁珠上解离下来，但仍与捕获抗体相结合。

我们提供了三种Dynabeads CELLection细胞分离试剂盒：

•CELLection上皮细胞富集试剂盒（货号16203）中包含了与anti-EpCAM单抗相偶联的Dynabeads磁珠。
•CELLection生物素结合剂试剂盒（货号11533D）适合应用您自备的生物素化抗体来对靶标细胞进行阳性分离
•CELLection泛小鼠IgG试剂盒（货号11531D）适合应用您自备的小鼠IgG来分离靶标细胞

在抗体浓度较低的情况下，生物素化效率会降低(操作手册中给出的最低浓度为0.5 mg / mL)。在公司内部，我们并没有使用低于0.5mg/mL的抗体，而是增加了DSB-X生物素的含量（从《DSB-X生物素蛋白标记试剂盒手册》(货号D-20655）中的表1可见在偶联反应中把DSB-X生物素含量从2 μL提高到4 μL可以提高反应效率)。< br / > < br / > 根据操作步骤生物素化0.5毫克/毫升的抗体：< br / > 0.5毫克/毫升x 0.2毫升 = 0.1毫克抗体< br / >生物素化的抗体的产量：在0.2毫升中的产量(0.1毫克抗体x 0.85%)= 0.4毫克/毫升< br / >在25μL中的生物素化的抗体量：0.4毫克/毫升x 25μL = 10μg，在推荐范围(每 5 x 10 e7细胞推荐5-50μg)。< br / > < br / > 生物素化0.2毫克/毫升的抗体：0.2毫克/毫升x 0.2毫升 = 0.04毫克抗体< br / >生物素化抗体的产量：在0.2毫升中的产量(0.04毫克抗体x 0.85%)= 0.17毫克/毫升< br / >在25μL中的生物素化的抗体量：0.17毫克/毫升x 25μL = 4μg，稍低于推荐范围。注意：可简单通过离心浓缩器（Centricon滤柱）对抗体进行浓缩，而不影响抗体的生物学活性。