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细菌碱性磷酸酶 (BAP) 可去除 DNA 和 RNA 中的3´和5´磷酸盐。BAP 在65° C 下保持活性至少1小时,通过苯酚萃取灭活。 应用:载体 DNA 的5´-磷酸化末端的去磷酸化作用,防止自身连接。激酶正向反应前核酸5´末端的去磷酸化。 来源:从大肠杆菌 C90纯化。 性能和质量测试:脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶及核糖核酸酶检测;测定去磷酸化 效率。 单位定义: 37°C 下,一个单位经30分钟水解1 nmol 的 ATP。 单位反应条件:10mM Tris-HCl (pH 8.0),1.5 mM [γ-32P]ATP 和酶,50 μl,经30分钟,37°C 下。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
产品类型碱性磷酸酶
数量2500 U
运输条件湿冰
酶BAP
Unit SizeEach
内容与储存
细菌碱性磷酸酶随附一瓶10 X 去磷酸化缓冲液 [100mM Tris-HCl (pH 8.0)]。保存于 -20°C。
常见问题解答 (FAQ)
Why are alkaline phosphatases used in cloning protocols? What is a typical protocol for dephosphorylation of nucleic acids?
Alkaline phosphatases are used to dephosphorylate the 5' ends of DNA. In cloning, it is used to prevent self-ligation of vector DNA. Standard ligation of DNA with ligase requires a 5' phosphate to be present on at least one of the ends being joined. When a DNA insert containing phosphates on both 5' termini is added to a dephosphorylated vector, the insert will be efficiently ligated into the vector, but the vector will not be able to self-ligate. Thus, dephosphorylation of vector lowers the number of background colonies containing vector without insert.