Pierce™ 单体亲和素琼脂糖

Thermo Scientific Pierce 单体亲和素琼脂糖是纯化生物素化蛋白、肽和其他分子的理想选择。

单体亲和素琼脂糖的特点：

•非变性—使用温和洗脱条件纯化生物素化产物（2 mM 游离生物素）
• 可重复使用—单体亲和素琼脂糖可至少再生和重复使用 10 次，并且在生物素结合能力方面仅出现边际损失（每次再生约降低 2.5 %）
• 特异性—保留生物素结合特异性和较低的天然亲和素非特异性结合
• 灵活—在各种生理缓冲液中结合样品，并使用 0.1M 甘氨酸或与 2 mM 生物素竞争洗脱
• 良好的结合能力—超过 1.2 mg 生物素化 BSA/mL 树脂

固定化的单体亲和素蛋白能够结合高特异性和中等亲和力的生物素，使得非生物素分子可以被洗去，然后在磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS) 中使用 2 mM 生物素对已结合的生物素标记分子进行竞争洗脱。该技术为生物素化蛋白纯化提供较温和的洗脱条件，避免了与传统亲和素或链霉亲和素方法相关的污染和其他问题。然后，可以使用 0.1M 甘氨酸再生单体亲和素色谱柱以去除残留结合生物素的色谱柱，而不丧失与另一生物素化样品结合的能力。

使用典型的亲和素或链霉亲和素，生物素结合亲和力 (Kd = 10^-15M) 非常大，以至于使用这些传统培养基进行纯化需要变性洗脱条件，如 pH 为 1.5 的 8M 胍·HCl，或在还原性 SDS-PAGE 样品上样缓冲液中进行煮沸。除了对生物素化的相关蛋白的不良影响外，这些苛刻的洗脱条件通常也会引起无关的蛋白（即亲和素或链霉亲和素亚单元）从树脂中剥离并与所需的纯化产物共洗脱。相比之下，当亲和素偶联到树脂（例如交联微珠状琼脂糖或 UltraLink 树脂）作为亚单元单体时，其对生物素的特异性保留，但其生物素结合亲和力降低到有利于后续洗脱的水平 (Kd = 10^-8M)。

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