Thermo Scientific Pierce 直接磁性 IP/Co-IP 试剂盒使用 NHS 化学将 IP 抗体共价固定在磁珠上，以实现有效的免疫沉淀和免疫共沉淀。

磁性 IP 与 NHS 化学较便利，可实现从任何种类和亚型中固定 IP 抗体，在使用蛋白 A 和蛋白 G 时观察到的偶联效率方面无变化。IP 抗体为共价连接，因此可以洗脱和分析靶蛋白或 co-IP 蛋白复合物，不会产生抗体污染。该试剂盒包含优化的方案以及使用手动磁力架或自动平台（如 Thermo Scientific KingFisher 仪器）实现抗体偶联和高得率 IP 或 co-IP 所必需的所有缓冲液和试剂。

直接磁性 IP/Co-IP 试剂盒的特点：

•无抗体 IP—抗体与磁珠不可逆地连接，使得完整抗体或重链和轻链与纯化抗原的共洗脱可忽略不计
• 快速—在不到 4 小时完成完整抗体结合和免疫沉淀
• 便利—IP/co-IP 试剂盒包含磁珠以及所有用于理想免疫沉淀所必需的缓冲液
• 抗体兼容—可与任何抗体种类、类别或同种型配合使用
• 低非特异性结合—对微珠表面进行预封闭，所有未反应的 NHS 酯基团均被完全淬灭
• 方案兼容—可手动或通过自动化操作（如 Thermo Scientific KingFisher 仪器）进行与微珠的蛋白偶联及免疫沉淀
• 可扩展—仅使用进行单次 IP 实验所需的抗体量或制备更多数量的抗体磁珠进行多次实验

Pierce 直接 IP/Co-IP 试剂盒方案可通过 NHS 酯化学将 IP 抗体偶联至 Pierce NHS 活化磁珠。然后将抗体结合微珠与淬灭缓冲液一起孵育，以阻断剩余的活性 NHS 位点。将制备的抗体结合微珠与含有目标蛋白抗原的细胞裂解物或组织提取物一起孵育，可以使抗原:抗体复合物形成。洗涤微珠以去除未结合的材料，并使用低 pH 值洗脱缓冲液从抗体结合微珠分离结合的抗原。包括中和缓冲液，以防止分离抗原沉淀，并确保下游应用中的蛋白活性。包含用于制备 SDS-PAGE 分析样品的泳道标志物样品缓冲液。该方案针对 2 至 10μg IP 抗体/检测进行了优化。为获得极佳 co-IP 得率，使用 10μ g 抗体。可使用磁力架手动处理或使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 等仪器通过自动化操作处理磁珠。

传统 IP（含 蛋白 A/G 磁珠），涉及抗体与蛋白 A/G 的被动、非共价偶联，通常可提供比 IP 方案（涉及通过交联或 NHS 酯化学进行的抗体与磁珠共价结合）更高的抗原得率。共价结合不可避免地会引起一些功能性抗体结合位点的损失。为了克服 NHS 化学的这一限制，可能需要在直接 IP 方法中使用比等效传统 IP 方法更多的 IP 抗体量。通过 IP 抗体与磁珠共价结合实现免疫沉淀的优势在于这是一种不含干扰抗体条带的 Western 印迹和凝胶。

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