ExpiCHO™ 表达系统试剂盒
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ExpiCHO™ 表达系统试剂盒
Gibco™

ExpiCHO™ 表达系统试剂盒

The ExpiCHO Expression System Kit combines the power of rapid, ultra-high-yield transient protein production in suspension culture with the benefit of expression in Chinese hamster ovary (CHO) cells.
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货号细胞系
A29133CHO-S、无血清培养基适用
A29133CNCHO-S Cells
货号 A29133
价格(CNY)
41,997.00
Each
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细胞系:
CHO-S、无血清培养基适用
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The ExpiCHO Expression System Kit combines the power of rapid, ultra–high-yield transient protein production in suspension culture with the benefit of expression in Chinese hamster ovary (CHO) cells. It is based on high-density culture of ExpiCHO-S cells in ExpiCHO Expression Medium. Transient expression is powered by ExpiFectamine CHO transfection reagent, designed specifically for high-density CHO suspension culture, in combination with a specialized transfection enhancer and culture feed.

All components work together synergistically with expression yields of 1–3 g per L of transfected culture demonstrated for some antibody and non-antibody proteins.

The ExpiCHO Expression System enables:

  • Milligram to multigram yields of recombinant protein per liter of culture in 5–14 days post-transfection
  • Robust and reproducible transfection results, for greater confidence in results and ability to use CHO cells from research to discovery
  • Transfection efficiency of > 90% for high-density suspension CHO cell culture, with matching transfection enhancer and culture feed to boost transfection performance and protein expression
  • Use of one-third to one-half less plasmid DNA than other transfection reagents
  • Flexible, reliable culture and transfection protocols with multiple options that readily fit into current transient expression workflows
  • Scalable expression for culture formats from <1 mL in deep well plates up to 5 L when using Nalgene angled-bottom shake flasks

The components included in the ExpiCHO Expression System Kit are: 2 vials of frozen ExpiCHO-S cells, 1 L of ExpiCHO Expression Medium, 1 ExpiFectamine CHO Transfection Kit sufficient to transfect 1 L of culture, OptiPRO SFM, and an antibody-expressing positive control vector.

ExpiCHO-S cells, ExpiCHO Expression Medium, ExpiFectamine CHO Transfection Kit, and OptiPRO SFM may also be purchased separately.

All components of the system are animal origin–free.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
规格
细胞系CHO-S、无血清培养基适用
输送类型转染
适用于(应用)蛋白生产、组成型表达
产品线ExpiCHO™
蛋白标记未标记
数量1 kit
运输条件ExpiCHO-S细胞干冰运输,其余组分室温运输
表达系统哺乳动物
促进剂CMV
类型表达系统
Unit SizeEach
内容与储存
• 2 瓶冷冻 ExpiCHO-S 细胞
• 1000 mL ExpiCHO 表达培养基
• 1 套 ExpiFectamine CHO 转染试剂盒(足够转染 1 L 培养物)
• 1 瓶表达抗体的阳性对照载体
• 100 mL OptiPRO 无血清培养基

除冷冻细胞需要储存在液氮中,其他所有组分在 2-8°C 下储存。

常见问题解答 (FAQ)

采用高滴度或最高滴度操作规程时,我发现有时细胞存活率在转染后大约第 7–8 天时会突然下降。该如何解决这个问题?

这种细胞存活率的突然降低往往提示蛋白表达过程中某些细胞培养条件不在最佳状态。发现这种问题时,应确认摇床速度在操作规程规定范围内;培养体积与培养瓶尺寸应相配;开始蛋白表达前操作 ExpiCHO-S 细胞时应小心,确保细胞不会因剧烈混匀动作而发生应激,等等。

有时,按照高滴度或最高滴度操作规程使用 125 mL 培养瓶培养时,不同瓶之间会有差异。此时,建议将 25 mm 摇床和19 mm 摇床的摇床速度分别提高到 130 rpm 和 140 rpm。

另外,我们发现如果使用 125 mL 培养瓶,那么有挡板培养瓶(baffled flask) 的效果更好,可消除不同瓶之间的差异——此时,考虑到挡板的影响,应将转染的细胞悬液量从 25 mL 增加到 35–40 mL,使其在挡板上达到最佳流动效果,同时其他试剂量也应相应调整。

使用有挡板培养瓶时也可使用较少的转染体积 (即 30–35mL);但此时考虑到挡板的影响,应稍微降低摇床速度 (即:将19 mm 摇床和 25 mm 摇床的速度分别设为 115 rpm 和 110rpm)。我们发现对于其他尺寸的培养瓶,使用有挡板培养瓶既无必要,也无益处。

ExpiCHO 蛋白表达可减少规模至比摇瓶更小的体积吗?

可以。如果使用 24 和 96 孔深孔板以及 50 mL 迷你生物反应管进行蛋白表达,请参照以下在线操作规程(https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/life-sciences/Protein%20Bio%20-%20Thermo/pdf/ExpiCHO-Protocols-Deep-Well-Blocks-Mini-Bioreactor-Tubes.pdf)。

澄清过程中有时ExpiCHO细胞上清液难以过滤。该如何解决这个问题?

由于 ExpiCHO 系统所用组分不同于以 HEK 293为基础的表达系统 (如:Gibco Expi293 系统),因此有时上清液可能较难通过普通的瓶顶过滤器进行处理。 解决这一问题时,我们建议首先将上清液以大约 5,000 x g 的离心力离心 30 分钟,然后再用 0.22 μm 过滤器过滤。其他过滤器 (如深层过滤器) 能提供更出色的上清液过滤性能,尤其是对较大的培养规模,因为此类过滤器专为处理 CHO 类表达系统的上清液而设计。

对于ExpiCHO表达系统的操作规程,应什么时候收集上清液?

收集时间高度取决于蛋白的性质。对于抗体等稳定蛋白,如果采用标准操作规程我们一般建议在转染后第 7–8 天收集,如果采用高滴度操作规程建议在第 9–10 天收集,如果采用最高滴度操作规程建议在第 11–12 天收集。此时细胞存活率应该仍然很高,理想状况下可达 70–80% 或更高。细胞内蛋白可能需要提早在第 4–7 天时收集。对于易于降解的蛋白,应该考虑设置不同的时间点收集,以确定最佳的收集时间。任何情况下,保持收集时细胞高存活率对蛋白质量和纯化都有好处。

对于高滴度和最高滴度操作规程有什么特殊说明吗?

按照高滴度和最高滴度操作规程调整温度时,建议使用一台专用的 32°C 培养箱,因为将 37°C 培养箱的温度改为 32°C后,培养箱的温度需要很长时间才能降下来,从而影响温度调整的效果。打开培养箱门降温可能会导致污染。