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我们不建议将感受态细胞保存在液氮中,因为极端温度会损害细胞。另外,装感受态细胞的塑料管子可能承受不了如此低的温度,从而发生破裂。
我们推荐将感受态细胞存储在-80摄氏度。高于这个温度,即使存储时间很短,也会显著降低其转化效率。
确保您使用了正确的抗生素和合适的浓度。另外,确保抗生素没有过期。如果克隆的形态和预期不同,那么污染可能是一个原因。检测您的SOC培液和LB培液。
以下是一些建议: •小片段/接头而不是您的插入片段被克隆进了您的载体。要解决这一问题,请在连接前对插入片段进行凝胶纯化。 •确保使用了正确的X-gal和/或IPTG(当载体带有lacIq标志物时)浓度。 •在平板上涂布X-gal和/或IPTG时,留出足够的时间让试剂充分扩散进入平板。 •孵育平板足够长的时间以确保颜色完全显现。
我们建议尝试以下措施: •进行pUC19转化对照;这可以告诉您所用感受态细胞的转化能力信息。 •检查平板的过期时间以及是否使用了正确的培液(LB/琼脂)。 •确认使用了正确的抗生素并且浓度也是对的。