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在Beckman Coulter's Biomek FX工作站上使用E-Gel 96琼脂糖凝胶和E-PAGE 96凝胶进行电泳的自动化脚本可在我们的网站上找到:www.thermofisher.com/egels(在左侧导航窗格内点击Labware Definitions链接)。
EG程序用于E-Gel 96和48凝胶电泳,而EP用于E-PAGE 96和48凝胶电泳。
这是因为上样孔周围的电场不均匀。应使用De-bubbling Roller将E-PAGE凝胶上样孔周围的突出部分压平。为得到最佳转印结果,我们建议对E-PAGE凝胶使用De-bubbling Roller。如果将Blotting Roller用于E-PAGE凝胶,应遵循使用手册(https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/iblotsystem_man.pdf)第22页的建议以获得良好的结果。
对于E-PAGE 48凝胶的半干转,我们建议使用含15%甲醇的2X NuPAGE转膜缓冲液;对于E-PAGE 96凝胶的半干转,我们建议使用无甲醇的2X NuPAGE转膜缓冲液。在25V恒定电压条件下转印30-60分钟。请参考E-PAGE技术指南(https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/epagetechguide_man.pdf)第33页。
E-PAGE凝胶转印的推荐方法是使用iBlot/iBlot 2干转系统进行干转(见E-PAGE技术指南(https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/epagetechguide_man.pdf)第27页)。请注意,该系统仅适用于E-PAGE 48凝胶。也可采用Invitrogen半干转仪(货号SD1000,第33页)进行半干转或采用半湿转法(第37页)。