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引用和文献 (1)
Invitrogen™
含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒。
The BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits combine the advantages of traditional RNAi vectors (stable expression and the ability to use viral delivery) with capabilities for tissue-specific expression and multiple target knockdown from the same transcript.
| 货号 | 数量 |
|---|---|
| K493900 又称 K4939-00 | 20 次反应 |
货号 K493900
又称 K4939-00
价格（CNY)
26,044.00
Each
数量:
20 次反应
价格（CNY)
26,044.00
Each
The BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits combine the advantages of traditional RNAi vectors (stable expression and the ability to use viral delivery) with capabilities for tissue-specific expression and multiple target knockdown from the same transcript. The BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits and the BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression Systems are designed to express artificial miRNAs which are engineered to have 100% homology to your target sequence and will result in target cleavage. Using Invitrogen's award-winning BLOCK-iT™ RNAi Designer, over 70% of constructs produce more than 70% knockdown.
BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒兼具了传统 RNAi 载体的优势（稳定表达和使用病毒递送的能力）与组织特异性表达和同一转录物中多次靶标基因敲低能力。BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒和 BLOCK-iT™ 慢病毒 Pol II miR RNAi 表达系统设计用于表达人工 miRNA，其经基因工程改造后具有靶序列 100% 同源性，将导致靶标切割。使用 Invitrogen’ 优质 BLOCK-iT™ RNAi Designer，70% 以上的构建体产生超过 70% 的敲低。Invitrogen Pol II 表达载体家族包括：
–CMV 立即早期启动子的强表达，可选择通过 MultiSite Gateway™ 重组使用组织特异性或其他调节启动子。
–与许多用于基因表达的 Invitrogen’ Gateway™ 目的 (DEST) 载体的兼容性。
–使用新的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒（含 EmGFP）控制 RNAi 响应启动的能力。
–含 EmGFP 的 BLOCK-iT™HiPerform™ 慢病毒 PolII miR RNAi 表达系统中一种新的目的载体。新载体含有一个 mRNA 稳定序列 (WPRE) 和一个核导入序列 (cPPT)，可产生高达 5 倍的病毒滴度和 EmGFP 表达水平。此外，从小鼠 Pgk-1 启动子中表达杀稻瘟菌素抗性，以避免多次传代后关闭。
–祖母绿 GFP (EmGFP) 的协同顺反子表达，导致 EmGFP 表达与 miR RNAi 敲低相关。
–在同一转录物上表达一个以上的经基因工程改造 miR RNAi 序列，允许同时敲低多个基因并产生合成表型
新的含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒提供了调节 RNAi 实验的能力。该试剂盒含有 pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体，在简单克隆和穿梭技术后，产生适用于诱导型敲低的 miR RNAi 表达载体。pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体包含带有两个四环素操纵基因 (tetO2) 序列拷贝的 CMV 启动子，允许高水平和调节表达。这允许在稳定转染细胞系中进行功能丧失研究，即使目的基因是必需的也可进行研究。此外，在基因功能恢复期间，可以停止 miR RNAi 表达的诱导，因此可以测量表型变化。
对于多种表达选项，包含 EmGFP（仅 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体）、miR 侧翼区和与目标靶标同源的 miRNA 的 miR RNAi 盒可轻松地转移到多种 DEST 载体中。这通过 Gateway™ 重组反应发生，在该反应中，将 miR RNAi 盒转移至 pDONR™ 载体中（BP 反应），然后转移至首选 DEST 载体中（LR 反应）。HiPerform™ 系统具有用于高病毒滴度和 EmGFP 表达的新 pLenti6.4/RF R2/V5-DEST 目的载体。
–CMV 立即早期启动子的强表达，可选择通过 MultiSite Gateway™ 重组使用组织特异性或其他调节启动子。
–与许多用于基因表达的 Invitrogen’ Gateway™ 目的 (DEST) 载体的兼容性。
–使用新的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒（含 EmGFP）控制 RNAi 响应启动的能力。
–含 EmGFP 的 BLOCK-iT™HiPerform™ 慢病毒 PolII miR RNAi 表达系统中一种新的目的载体。新载体含有一个 mRNA 稳定序列 (WPRE) 和一个核导入序列 (cPPT)，可产生高达 5 倍的病毒滴度和 EmGFP 表达水平。此外，从小鼠 Pgk-1 启动子中表达杀稻瘟菌素抗性，以避免多次传代后关闭。
–祖母绿 GFP (EmGFP) 的协同顺反子表达，导致 EmGFP 表达与 miR RNAi 敲低相关。
–在同一转录物上表达一个以上的经基因工程改造 miR RNAi 序列，允许同时敲低多个基因并产生合成表型
新的含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒提供了调节 RNAi 实验的能力。该试剂盒含有 pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体，在简单克隆和穿梭技术后，产生适用于诱导型敲低的 miR RNAi 表达载体。pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体包含带有两个四环素操纵基因 (tetO2) 序列拷贝的 CMV 启动子，允许高水平和调节表达。这允许在稳定转染细胞系中进行功能丧失研究，即使目的基因是必需的也可进行研究。此外，在基因功能恢复期间，可以停止 miR RNAi 表达的诱导，因此可以测量表型变化。
对于多种表达选项，包含 EmGFP（仅 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体）、miR 侧翼区和与目标靶标同源的 miRNA 的 miR RNAi 盒可轻松地转移到多种 DEST 载体中。这通过 Gateway™ 重组反应发生，在该反应中，将 miR RNAi 盒转移至 pDONR™ 载体中（BP 反应），然后转移至首选 DEST 载体中（LR 反应）。HiPerform™ 系统具有用于高病毒滴度和 EmGFP 表达的新 pLenti6.4/RF R2/V5-DEST 目的载体。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
克隆方法Gateway™
构成或诱导系统诱导
输送类型转染
基因GFP (EmGFP)
产品线BLOCK-iT
产品类型RNAi 表达载体试剂盒
数量20 次反应
RNAi 类型miRNA
选择试剂（真核生物）杀稻瘟菌素
载体BLOCK-iT RNAi 载体
产品规格试剂盒
促进剂CMV/TO
Unit SizeEach
内容与储存
含 EmGFP 的 BLOCK-iTTM 诱导型 PolII miR RNAi 表达载体试剂盒包含带有线性化 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR、10X 退火缓冲液、T4 DNA 连接酶、5X DNA 连接缓冲液、lacZ 对照寡核苷酸、lacZ 对照质粒、阴性对照质粒、无 DNase/RNase 水以及正向和反向测序引物的克隆盒。该试剂盒还包含 pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体试剂盒（包括 pT-REx-DEST30 和 pT-REx/GW-30/lacZ 载体）和 T-RExTM 调节模块（包括 pcDNA™6/TR 和四环素）。包括 Gateway™ LR 和 BP Clonase™ 试剂盒、杀稻瘟菌素和 pDONRTM221。将载体、缓冲液、对照寡核苷酸和质粒、抗生素、clonase 试剂盒、水和测序引物储存在 -20°C 下。One Shot™ 盒含有转化试剂，包括 21 份 50 µL One Shot™ TOP10 化学感受态大肠杆菌、S.O.C. 培养基和 pUC19 超螺旋对照质粒的等份试液。将这些转化试剂储存在 -80°C 下。
常见问题解答 (FAQ)
我在使用含EmGFP的表达克隆时，未得到荧光信号。我该怎么办？
我得到了非特异性、脱靶的基因敲低。我该怎么办？
我在滴定后未得到任何细胞克隆。你们有何建议？
我得到了很少的菌落或无菌落，甚至包括转化对照组。可能原因是什么？
我发现基因敲低的水平较低或无基因敲低。你们有何建议？
引用和文献 (1)
引用和文献
Abstract
AID-induced decrease in topoisomerase 1 induces DNA structural alteration and DNA cleavage for class switch recombination.
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:20018730
'To initiate class switch recombination (CSR) activation-induced cytidine deaminase (AID) induces staggered nick cleavage in the S region, which lies 5'' to each Ig constant region gene and is rich in palindromic sequences. Topoisomerase 1 (Top1) controls the supercoiling of DNA by nicking, rotating, and religating one strand of DNA.