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是的,您可以使用溴化乙锭、SYBR Green I、SYBR Green II和SilverXpress银染试剂盒对TBE凝胶染色。采用溴化乙锭染色时,将胶侵泡在使用超纯水配制的2 µg/mL溴化乙锭溶液中20分钟。染色后使用超纯水连续冲洗3次,每次10分钟,除去未结合染料。在紫外灯下观察条带。
以下是可能原因和解决方案: •未在适当时间将终止液加到凝胶上。加入终止试剂的时间应稍早于达到所需条带染色强度的时间。 •蛋白上样量过多。降低凝胶上的蛋白上样量。
这通常是因为蛋白上样量过多。我们建议降低每条条带的蛋白上样量。对于未知蛋白,为了确定最佳上样量,可能需要进行连续稀释。
使用以下视觉线索作为正确完成每一步的标志: •敏化步骤完成后,低比例浓缩胶与分离胶相比出现白色不透明物[状],表明这一步正确完成。 •敏化步骤后第一次水洗时,小型凝胶卷曲成圆柱形并漂在液面。 •同时加入Stainer A和Stainer B时,形成短暂可见的棕色沉淀。这种棕色沉淀短暂出现后消失,表明染色液正确混合。如果棕色不褪去,则丢弃溶液,并在干净的玻璃器皿中重新配置混合液。
通常,Tricine凝胶的背景染色会稍高于Tris-甘氨酸凝胶。与Tris-甘氨酸凝胶相比,Tricine凝胶中相对较高的溶质浓度可能会减慢溶液进入凝胶的速度。为解决该问题,可延长敏化步骤中的浸泡时间(可过夜),然后再继续后续步骤。