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氯丁醇可用作NuPAGE转膜缓冲液的防腐剂,但对于蛋白质的有效转印并不是必要的。若配制缓冲液时未加入氯丁醇,则应注意缓冲液不能长期稳定保存。建议在配制后2周内用完。
我们不建议使用碳酸盐或CAPS转膜缓冲液进行NuPAGE凝胶转印,因为这会降低转印效率。此外,这些缓冲液的高pH环境(>pH 9)会使NuPAGE抗氧化剂丧失功能。
为提高NuPAGE凝胶上大分子蛋白[高分子量蛋白]的转印效率,我们建议在安装“三明治”前,将凝胶置于含有0.02–0.04% SDS的2x NuPAGE转膜缓冲液(无甲醇)中预平衡10分钟,然后使用含甲醇和0.01%SDS的1XNuPAGE转膜缓冲液进行转印。
尽管我们推荐使用NuPAGE样品还原剂以加强稳定性,但新鲜的β-巯基乙醇可以代替NuPAGE样品还原剂并获得相同的结果。通常,终浓度为2–5%的β-巯基乙醇足以还原样品。
NuPAGE样品还原剂(10X)含有0.5M DTT(二硫苏糖醇)和独特的稳定剂。