Pro-Q™ Diamond 磷蛋白凝胶染色剂

许多总蛋白染色剂，包括SYPRO Ruby凝胶染色剂和Coomassie Blue染色剂，会使Pro-Q Diamond信号淬灭。如果您在使用Pro-Q Diamond染色剂对凝胶或印迹膜进行染色时，使用了之前用于总蛋白染色剂的容器，则染色托盘中残留的总蛋白染色剂可能会污染您的凝胶。染色时应使用新的容器（如塑料称量船），每种染色剂使用指定容器，或用乙醇彻底冲洗容器并用Kimwipe纸巾擦去所有残留物。

这表示Pro-Q Diamond染色剂已降解，应丢弃染色液。可能是因为染色剂已超过保质期或在保存期间过多暴露于室内灯光。暴露于室内灯光会使染色剂分子逐渐降解，切割磷酸盐结合部分，将染色剂变为非特异性蛋白染色剂。这会发生在染色剂光漂白之前，但是整体信号会比非降解染色剂的特异性信号弱。染色后的凝胶不太可能被保存，但您可尝试通过重复过夜固定步骤而完全去除染色剂，通过水洗去除固定剂，然后使用新的Pro-Q Diamond磷酸化蛋白凝胶染色剂再次染色。

为获得最佳染色特异性，应除去凝胶上的所有SDS和固定剂。固定步骤可除去SDS，水洗步骤可除去固定剂。为确保除去所有SDS和固定剂，有必要进行多次固定及多次水洗。在固定和水洗步骤中，较大的或较厚的凝胶可能需要更多的溶液或更长的孵育时间，或者也可以进行微波染色。可能需要延长凝胶的脱色时间。将凝胶放回到脱色液中继续孵育，直到PeppermintStick标准品泳道中只能看到2条条带。

为了使Pro-Q Diamond磷酸化蛋白凝胶染色剂正常工作，应在电泳前按着说明书中步骤进行氯仿/甲醇沉淀操作，将样品进行去脂化和脱盐处理。Pro-Q Diamond染色剂也能与磷脂结合，而反离子和高盐浓度可遮盖染色剂与磷酸盐的电荷相互作用。

其他已知的磷酸化蛋白质可以用作Pro-Q Diamond磷酸化蛋白质染料的阳性对照标准品。蛋白质分子量标准品试剂（货号P6649）中的卵清蛋白就是一种磷酸化蛋白质。Mark12、Invitrogen Sharp、SeeBlue或SeeBlue Plus2标准品中的蛋白质，都不是可以用作Pro-Q Diamond磷酸化蛋白质染料的阳性对照的磷酸化蛋白质。