iBind™ 蛋白质免疫印迹处理系统

以下是可能原因和解决方案：

- 转印效果差或转印不完全： 重复转印。
- 膜的转印垫不干净或污染： 使用转印垫前，用去污剂浸泡，然后用纯水彻底清洗。转印垫破损或变色后，则更换新的转印垫。
- 膜未完全湿润： 遵循预润湿膜的说明。
- 膜被指纹或角蛋白污染： 始终佩戴干净的手套并使用镊子来处理膜。处理膜时，仅触碰膜的边缘。
- 封闭不均匀： 孵育皿应足够小，使封闭液能够完全覆盖膜。
- 使用墨水标记膜： 使用墨水对膜进行标记，仅限于印迹膜的低分子量区域。
- iBind卡片损坏： 更换新卡片。应确保膜在卡片上的移动仅限于膜区域内。
- 膜与iBind卡片接触不良： 加入1 mL 1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液后，立即将膜放到iBind卡片上。使用附带的滚轮，确保接触良好。

以下是可能原因和解决方案：

- iBind卡片损坏： 更换新卡片。应确保膜在卡片上的移动仅限于标有“膜”的区域内。
- 膜组在运行前是湿的： 应确保将5 mL 1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液加到iBind卡片的平坦区。不要将溶液加到膜组上。
- iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液准备不当： 按照使用手册（https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/ibind_man.pdf）的说明，准备1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液。

以下是可能原因和解决方案：

- 蛋白质上样量过高： 减少上样量或稀释样品浓度。
- 转印效果差或转印不完全： 重复转印。
- 一抗浓度过高： 按照生产商的建议稀释一抗或通过点印迹法确定最佳抗体浓度。

以下是可能原因和解决方案：

- 转印效果差或转印不完全： 重复转印。转印后，对膜进行染色以衡量转印效率。使用阳性对照和/或分子量标记物。
- 膜未完全湿润： 遵循预润湿膜的说明。
- 一抗浓度过低： 按照生产商的建议稀释一抗或通过点印迹法确定最佳抗体浓度。
- 一抗失活： 通过点印迹法确定抗体活性。
- 一抗与抗原的亲和力较低： 获取更高亲和力的一抗。
- 二抗溶液污染： 始终佩戴手套，瓶子在未使用时始终保持拧紧状态。制备试剂时，只使用纯水。
- 目标蛋白跑出凝胶： 应确保凝胶分离范围与待转印蛋白的大小是匹配的。
- 蛋白质保留较差： 应确保凝胶分离范围与待转印蛋白的大小是匹配的。使用具有相关大小蛋白质的分子量标记物。较大的蛋白质需要较长的转印时间，较小的蛋白质所需转印时间较短。使用具有适当结合能力的膜。
- iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液准备不当： 按照使用手册的说明，准备1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液。
- 向iBind孔中加入溶液时出错： 应确保将溶液加到正确的孔中，并按正确顺序向孔中加液。
- 印迹膜在iBind卡片上的位置不当： 应确保印迹膜上有蛋白质的一面与iBind卡片接触，并放置在标有“膜”的区域。
- 膜组在运行前是湿的： 应确保将5 mL 1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液加到iBind卡片的平坦区。不要将溶液加到膜组上。
- 不同孔中的溶液发生交叉污染： 运行期间，不要移动iBind蛋白印迹处理仪。
- iBind卡片损坏： 更换新卡片。应确保膜在卡片上的移动仅限于标有“膜”的区域内。
- 膜与iBind卡片接触不良： 加入1 mL 1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液后，立即将膜放到iBind卡片上。使用附带的滚轮，确保接触良好。
- 在运行结束前打开设备： 卡片在设备中时，不要打开设备。重新密封卡片上的孔，可导致泄漏。
- 样品制备不当；抗原性减弱或损毁： SDS和还原剂可能干扰一些抗体/抗原亲和力
- 样品太稀： 提高蛋白质样品的浓度，或增加上样量。
- 蛋白质与膜的结合较弱： 转膜液应含10–20%甲醇。
- 曝光时间不足： 对膜进行二次曝光，并延长曝光时间。
- 底物孵育不充分： 应确保每一步都达到指定时间，或在达到可接受的信噪比时，从底物中取出印迹膜。
- 底物污染： 始终佩戴手套，瓶子在未使用时始终保持拧紧状态。制备试剂时，只使用纯水。
- 印迹太旧： 蛋白质会随时间降解。应使用新制备的印迹。

以下是可能原因和解决方案：

- 膜被指纹或角蛋白污染： 始终佩戴干净的手套并使用镊子来处理膜。处理膜时，仅触碰膜的边缘。
- 一抗浓度较高： 按照生产商的建议稀释一抗或通过点印迹法确定最佳抗体浓度。
- SDS残留或转印后蛋白质与膜的结合较弱： 根据使用手册（https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/ibind_man.pdf）的指示，遵循免疫检测前的膜准备说明。
- 一抗对蛋白标准品具有亲和力： 向蛋白标准品生产商咨询蛋白标准品与一抗的同源性。
- iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液准备不当： 按照使用手册（https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/ibind_man.pdf）的说明，准备1X iBind溶液/iBind荧光检测（FD）溶液。