ELISA与Western Blot比较：何时使用每种免疫分析技术

目录

引言
什么是ELISA？
ELISA的优点
ELISA的缺点
什么是蛋白质印迹（western blot）？
蛋白质印迹的优点
蛋白质印迹的缺点
何时使用ELISA进行蛋白分析
何时使用蛋白质分析的西方印迹法（Western Blot）
更多工具和资源
酶联免疫吸附测定（ELISA）
西方印迹法（Western Blotting）

作者：Frances Gatta

酶联免疫吸附测定（ELISA）和西方印迹法（Western Blot）是识别、定量和分析蛋白质的宝贵方法。

ELISA是一种高度灵敏、特异且多功能的技术，能够在复杂生物样本中检测到纳摩尔浓度的蛋白质。该方法操作相对简单，并可同时分析大量样本。然而，与西方印迹法相比，ELISA更容易产生假阳性或假阴性结果，并且无法提供关于目标蛋白的全面信息。

另一方面，虽然蛋白质印迹（western blotting）流程较为复杂，但通常能够提供清晰且易于解释的结果。它常被用作对ELISA及其他检测方法所得结果的确认工具。

什么是ELISA（酶联免疫吸附测定）？

酶联免疫吸附测定或称ELISA，是一种高度灵敏和特异性的酶免疫分析技术，可用于定量和定性分析抗体或抗原，包括蛋白质、激素、肽、核酸等。

ELISA在96孔聚苯乙烯吸附板上进行。这些板可以使抗体或抗原黏附，并允许在同一次实验中筛查大量样本。

ELISA可按照以下步骤进行：四个基本步骤：将抗体或抗原包被到板上，用牛血清白蛋白（BSA）或其他分子封闭，加入能产生颜色的底物进行检测，并读取结果。

ELISA有四种主要类型, 包括

1. 直接ELISA：在这里，使用包被抗原的板来检测抗体。
2. 间接ELISA：此类型中，使用包被抗原的板来筛查抗原或抗体。
3. 夹心ELISA：3.它利用包被抗体的板筛查抗原。抗原夹在捕获抗体和检测抗体之间，因此得名“夹心”。
4. 竞争性ELISA：该检测用于识别针对待测血清中抗原特异性的抗体。

ELISA的优缺点

优点

• 这是一种高效节省时间的方法，用于判断样品中是否存在蛋白质。
• 操作流程简单快捷，几乎不需要复杂的样品制备。
• 作为一种更灵敏的免疫分析方法，可以检测到单一蛋白或样品中低浓度蛋白。
• 可以同时进行多项分析。
• 通常使用的是成本较低的试剂, 使其对预算有限的情况下具有成本效益，尤其适合有经验的用户选择未包被的ELISA试剂盒。
• 它是定量蛋白浓度或监测蛋白水平随时间变化的极佳工具。

 缺点

• 由于技术错误、样本污染、低质量试剂等原因，其特异性有限，更容易出现假阳性或假阴性结果。
• ELISA试剂盒中的抗体必须冷藏运输和储存，因为它们容易不稳定。
• 它不能用于获得关于目标蛋白其他信息，如其分子质量。

 

什么是蛋白质印迹（western blot）？

蛋白免疫印迹法（Western Blot），也称为免疫印迹，是一种常规技术，用于检测和定量目标蛋白，包括复杂混合物中低丰度蛋白的检测。它是一种宝贵的检测方法，用于识别和理解蛋白质特征元素、蛋白质-蛋白质相互作用、修饰等。  

Western blot（蛋白质印迹法）首先通过凝胶电泳根据分子量将混合物中的蛋白质分离开来。分离后的蛋白质从凝胶转移并结合到蛋白结合膜上。最后，该膜用针对目标蛋白的抗体进行探针检测，从而在膜表面实现对其的检测。

西方印迹法的优缺点

优点

• 当操作得当时，它可以提供精确且易于解释的结果。
• 它具有高度特异性，能够从成千上万种蛋白质中识别目标蛋白。在如裂解液等复杂样本中。
• 它可以在一次实验中提供目标蛋白分子量的信息，同时还能识别微小修饰，并为可能具有相似性质的蛋白质提供可视化识别。  

缺点

• 它通常更适合作为确认工具，而非完全定量工具。
• 这可能是一项成本高昂且耗时的操作。
• 检测信号可以减弱迅速地，除非使用长效底物（8-24小时）或荧光染料。  
• 它是对样品制备中的杂质更为敏感，这些杂质可能导致高背景噪音 or other detection difficulties. 

 

ELISA 与蛋白免疫印迹（Western Blot）

ELISA和蛋白质印迹（western blot）是两种常用的蛋白质检测与分析方法。虽然ELISA是一种出色的蛋白质检测和定量工具，但蛋白质印迹通常用于确认ELISA测试的结果，因为它更有可能提供明确的结论。与ELISA只能给出“是”或“否”的答案不同，蛋白质印迹还能从复杂混合物中获得关于目标蛋白的大量信息，包括其大小和丰度。

以下是关于在何时使用每种技术进行蛋白质检测和定量的指南。

何时使用ELISA进行蛋白分析

作为最灵敏的免疫分析方法，ELISA凭借其高灵敏度可用于检测少量、稀有及低丰度目标蛋白。当你需要精确测定蛋白浓度时，ELISA更为合适。而蛋白质印迹只能测量相对蛋白丰度，无法获得绝对浓度。

速度也是选择ELISA而非蛋白质印迹的另一个原因。ELISA操作流程更快，对样品准备要求较低，非常适合日常检测实验。与蛋白质印迹不同，ELISA采用微孔板和读板仪，可实现快速样品分析。​

此外，ELISA过程也更加简便。它使用较小体积样品和标准96孔板，并支持多重检测，还可以实现自动化，从而减少错误和重复性手工操作。如果你需要高通量或自动化实验室设置，可以选择这种方法。此外，相比涉及凝胶分离、膜转移、成像等复杂步骤的蛋白质印迹，将ELISA教学传授给初级科研人员会更容易一些。

如果你只需要知道某种蛋白是否存在，以及可能想要检测其浓度，那么仅用ELISA就足够了。

了解如何选择合适的ELISA试剂盒类型 >>

何时使用蛋白质印迹进行蛋白分析

Western印迹法最适合从复杂的混合物或样本中检测各种蛋白质。使用Western印迹法的另一个关键原因是它在测量蛋白质时具有高度特异性，即使在相对较低的水平下也能检测到。

假如你需要关于蛋白质的更多信息，比如分子量、纯度、蛋白-蛋白相互作用细节、蛋白表达变化或翻译后修饰等，Western印迹法可以成为一个强有力的工具。

如果你对结合抗体的特异性有信心，并且确信它能够检测非靶标蛋白，Western印迹法也是一个极好的选择。特别是荧光Western检测，可以实现多重检测，在一次实验中分析多种蛋白质。

最后，Western印迹法通常被用作许多其他补充性蛋白分析方法（如ELISA或质谱）的确认工具，,尤其是在临床医学诊断中，因为它对于排除假阳性或假阴性结果非常可靠。结果为阴性的情况。

欢迎查阅我们的《2024定量Western印迹发表指南》。 >>

更多工具与资源

酶联免疫吸附测定（ELISA）

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蛋白免疫印迹（Western Blot）

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参考文献

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