基于 BacMam 的细胞检测

与其他类型的细胞检测相比，基于 BacMam 的细胞检测可最大限度地减少生成稳定细胞系的需求，同时还可选择细胞背景，从而缩短检测开发时间。用 BacMam 试剂转导细胞后，利用 LanthaScreen® 技术进行读数。此检测形式采用简单的“只需加样”方案，所需的手动操作时间很短（ 图1）

图1. 基于 BacMam 的细胞检测工作流程。使用可编码 GFP 融合蛋白的 BacMam 试剂处理细胞，并以384孔形式铺板。在转导后24小时，对细胞进行刺激以诱导 GFP 底物的翻译后修饰（例如磷酸化[如图所示]）。然后在存在铽抗修饰特异性抗体的情况下裂解细胞，之后进行LanthaScreen® 检测读数。

使用 BacMam 试剂成功转导的细胞类型包括大量转化细胞系（例如 U2-OS、HEK 293 和 HeLa）、许多原代细胞（例如成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞）及干细胞（例如脂肪细胞来源的干细胞和间充质干细胞）。已经证明可对这些细胞进行高效转导，而不会产生不良影响（图2）。

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图2.在各种细胞背景下采用基于 BacMam 的细胞检测试剂盒检测组蛋白 H3 第9位赖氨酸乙酰化。(A) 786-0；(B) U2-OS；(C) HCT-116。用 BacMam 组蛋白 H3 试剂对细胞进行转导并将细胞接种到低血清检测培养基的384孔检测板上进行过夜培养。然后使用所示量的曲古抑菌素 A（HDAC 抑制剂）处理细胞3小时，随后进行 LanthaScreen® 检测。所有三项检测的响应比均高于3.0。基于 BacMam 的细胞检测在各种细胞类型中得到相似的结果。

核小体功能受磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等多种动态翻译后修饰的高度调控。在基于 BacMam 的细胞检测中使用 LanthaScreen® 技术，可检查对特定底物的多种翻译后修饰，前提是具有修饰特异性抗体。对于组蛋白 H3 的 Lys9 乙酰化和组蛋白 H3 的 Ser10 细胞周期依赖性磷酸化，可分别使用铽标记的抗组蛋白 H3 乙酰基-Lys9 和抗磷酸化 Ser10 特异性抗体进行检测（图3和4）。通过基于 BacMam 的细胞检测，能够检测负责翻译后修饰的多种酶活性，包括组蛋白等具有挑战性的靶标。



图3. 采用基于 BacMam 的细胞检测试剂盒检测组蛋白 H3 第9位赖氨酸乙酰化。用 BacMam 组蛋白 H3 试剂对 U2-OS 细胞进行转导并 将细胞接种到低血清检测培养基的384孔检测板上进行过夜培养。然后用指定量的 HDAC 抑制剂处理细胞3小时，随后进行 LanthaScreen® 检测。BacMam 组蛋白 H3 [AcLys9] 细胞检测试剂盒具有广泛效力，可用于检测已知的 HDAC 抑制剂。

图4.  采用基于 BacMam 的细胞检测试剂盒检测组蛋白 H3 第10位赖氨酸磷酸化。用 BacMam 组蛋白 H3 试剂对 U2-OS 细胞进行转导并将细胞接种到低血清检测培养基的384孔检测板上进行过夜培养。(A) 然后使用所示量的花萼海绵体诱癌素 A 处理细胞1小时，随后进行 TR-FRET 检测。(B) 使用极光激酶抑制剂 VX680 对细胞进行 1 小时预处理，然后用花萼海绵体诱癌素 A 额外孵育一小时，随后进行 LanthaScreen® 检测。BacMam 组蛋白 H3 [pSer10] 细胞检测可成功测量极光激酶活性。

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