高效液相色谱检测器 – (U)HPLC技术

当谈到液相色谱用于检测分析物的方法有很多选择,但哪一种具有最高的灵敏度、最适合您的特定应用,并且最具性价比呢?在本文中,我将简要介绍可用的(U)HPLC检测器类型、它们的优缺点,并提供一些进一步了解的信息来源。

紫外-可见吸收检测器UV-Vis Absorption Detectors这些是液相色谱中最常用的检测器,可用于检测许多应用领域中的广泛分析物。此外,紫外-可见吸收检测器还有不同类型:二极管阵列检测器(DAD)具有高灵敏度和几乎均匀的响应,而可变波长检测器(VWD)为日常使用提供出色的线性和稳健性。例如,如果您要分析微量杂质,我建议使用DAD,而对于常规质量控制(QC)程序,VWD可能是更好的选择。

  • 优点:操作简单、应用广泛且成本效益高
  • 缺点:分析物必须含有发色团

应用说明就是一个很好的例子,展示了采用LightPipe™技术的DAD所带来的灵敏度提升。

荧光检测(Fluorescence Detection)这种检测器是最灵敏的之一,其灵敏度比UV-Vis高出三到六个数量级。现代荧光检测器还允许同时监测多个激发/发射波长对。

  • 优点:高灵敏度和高选择性
  • 缺点:分析物必须含有荧光基团,或需要衍生化或荧光标记

你可以观看关于HPLC荧光检测的概述白板视频

电化学检测器(Electrochemical Detectors)这些检测器通常用于在复杂基质中对发生氧化或还原反应的化合物进行高灵敏且高选择性的检测,如神经递质。与安培池(amperometric cells)配合使用可获得高灵敏度、低样品体积,并通过库仑传感器(coulometric sensors)最大化选择性和灵敏度。

  • 优点:高灵敏度和高选择性
  • 缺点:化合物必须具有电化学活性

折光指数检测器(Refractive Index Detectors, RI)常被遗忘的检测器!它通过测量流动相的折光指数与样品偏转之间的差异(利用斯涅尔定律)来工作。其应用领域包括无色团化合物以及糖类和聚合物的检测。

  • 优点:成本效益高,且分析物不需要含有发色团
  • 缺点:不适用于梯度洗脱方法,灵敏度也相对较低

带电气溶胶检测器(Charged Aerosol Detection, CAD)该检测器常被简称为CAD,可实现通用检测并具有近乎均一的响应,这意味着它可用于多种不含发色团或荧光团的分析物,并能在无需参考标准品的情况下进行相对定量。

  • 优点:通用型检测器,适用于缺乏发色团或难以电离的分析物,并可提供相对定量结果
  • 缺点:对挥发性和部分半挥发性化合物的检测效果较差

质谱法(Mass Spectrometry, MS)虽然并不总是被视为一种检测器,而更像是一台独立仪器,但质谱仪不仅可以进行检测,还能实现鉴定,并且能够使用不同流速(纳流、微流、毛细管及分析级)的液相色谱系统。

  • 优点高灵敏度,广泛的化合物检测范围和结构鉴定能力
  • 缺点价格昂贵,通常不如其他检测器直观易用

电导率和pH监测仪(Conductivity and pH Monitors)顾名思义,这些设备不是用于分析物的检测,而是用于监测pH值和电导率。它们对于盐梯度监测和pH梯度监测非常有用,主要应用于生物制药分离过程。

正如你所看到的,在(U)HPLC检测器方面有许多选择,每种都有其独特的功能和应用。哪一种最适合你的需求取决于多个因素,如应用领域、分析物性质、预算以及使用便捷性。在许多情况下,将不同类型的检测器结合使用可以更全面地了解样品。

更多资源

Vanquish Flex UHPLC系统HDI部分图片,230×195

我们最近举办了一个关于HPLC检测器的五部分网络研讨会系列,概述了各种类型的检测器、操作机制、针对特定应用如何选择检测器,以及实用技巧。请访问thermofisher.com/lc-webinars即可按需观看。

在这个页面上了解各种类型的检测器信息丰富的网页,并包含各类检测器的链接。

Written by:

Bioprocessing Staff

Read more Bioprocessing Staff

发表回复

您的邮箱地址不会被公开。 必填项已用 * 标注