RNAi服务

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一、RNAi服务概述：

RNA干扰（RNA interfering，RNAi）现象是由与靶基因序列同源的双链RNA引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰，可以特异地将基因沉默，从而使基因功能丧失或基因表达量的降低，因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。RNAi技术可广泛应用到包括功能学，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析，疾病治疗等领域。我们应用专利算法和Invitrogen的BLOCK-iT™ RNAi Designer平台，可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源性分析，完成siRNA/shRNA/miRNA等多种序列的设计，并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi相关的病毒包装、RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

图 1: RNAi服务

二、RNAi服务类别：

1.siRNA合成

对于瞬时基因沉默试验，化学合成siRNA的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性；针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到70%（在转染效率大于80%的情况下）。

2. RNAi载体构建

RNAi载体表达可以长时间稳定地研究基因功能，载体在细胞中持续抑制靶基因的表达可达数星期甚至更久。

• BLOCK-iT™ miR RNAi载体构建 — 利用细胞内源性的miRNA加工机制，相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构，并具有采用EmGFP进行表达追踪和顺式表达多个miRNA的优点。Invitrogen针对人类、大鼠、小鼠的大多数基因预先设计好了BLOCK-iT miR RNAi Select序列，每个基因设计的4条BLOCK-iT miR RNAi Select序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的knockdown（在转染效率>80%的前提下）。
• BLOCK-iT™ shRNA载体构建 — 设计针对特定基因的shRNA序列，并将其连入组成型pENTR™/U6或诱导型pENTR™/H1/TO载体中。
  
  

3. RNAi导入优化

由于siRNAs是进入细胞后才能对蛋白的表达进行抑制，因此如何高效地将siRNAs转入细胞也是成功抑制基因表达的关键步骤。例如，一个siRNA分子对某特定基因的抑制效率为90%，而转染效率为10%，那么最后抑制蛋白表达最后的效率只有9%，可见如何提高siRNAs的导入效率非常重要。

• RNAi转染优化 — 为了使得RNAi实验获得最大化的干扰效果，利用Invitrogen专利的脂质体转染试剂技术，针对多种真核生物细胞进行转染参数的优化。RNAi 荧光标记的阴性对照、阳性对照可以用于进行转染效率的优化。
• 病毒侵染优化 — 针对难于转染细胞（特别是神经细胞、悬浮细胞、干细胞）和In vivo实验，基于Invitrogen的RNAi病毒载体构建、包装、浓缩等技术，利用腺病毒或慢病毒进行RNAi研究。
• 筛选RNAi稳定细胞株 — 利用抗生素来筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株。
  
  

4. RNAi干扰效果检测

用实时定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲减效果；通过Western blot方法检测蛋白水平的基因敲减效果。

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