蛋白表达服务

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一、蛋白表达服务概述：

随着人类基因组计划的完成，蛋白表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明，利用蛋白表达系统表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。根据不同的表达要求，如表达量高低、目标蛋白的活性和表达产物的纯化方法，可选用适当的表达系统及相应的表达策略。

图 1: 蛋白表达服务

二、蛋白表达服务类别：

1. 哺乳动物稳定转染细胞系构建

外源基因转染后，通过抗性筛选整合到细胞基因组中的阳性克隆，以获得稳定表达的细胞系。哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够进行蛋白质的正确折叠，提供多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。

2. 哺乳动物细胞瞬时表达

利用Invitrogen的FreeStyle™系统，针对悬浮CHO和293细胞进行质粒瞬时转染；可快速地获得mg级蛋白（无需构建稳定细胞系），使用的无血清培养基可简化下游纯化分泌蛋白的工作。

3. 腺病毒表达

适用于在可分裂或非分裂哺乳动物细胞中进行高效瞬时表达；采用简单快速的GateWay克隆技术，重组效率高达100%；可获得高滴度的病毒（普通条件可达109 -1010pfu/ml，浓缩后可达1011-1012 pfu/ml），有效导入培养的分裂型和非分裂型哺乳动物细胞和进行体内研究；采用了复制缺陷型的病毒，生物安全性更高.

4. 慢病毒表达

可以进行瞬时表达，也可以通过杀稻瘟霉素（Blasticidin）或Zeocin选择试剂进行筛选，使目的基因在靶细胞中得到稳定表达。

5. 原核表达

一般用于表达几乎所有无特殊修饰的蛋白质；可在不同的菌株中表达，同时尝试不同的诱导条件，包括：诱导时OD值、诱导温度、IPTG浓度、诱导时间。

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