AAV腺病毒载体构建与分析

Thermo Scientific ProPac 3R SAX 3μm 色谱柱 采用线性盐梯度和线性盐梯度，可出色地分离完整和空 AAV 衣壳和其他杂质，如应用说明盐 梯度分离和腺相关病毒样品分析所示使用3μm 单分散强阴离子交换色谱柱 。其独特的色谱柱设计具有 AAV腺病毒载体分析所需的高分辨率，稳健性能和批间重现性。  

除了含有所需基因材料的完整 AAV 衣壳，AAV腺病毒载体的最终产品还可能含有多种不同类型的工艺以及产品相关杂质。在需要监测，表征 AAV 衣壳蛋白的氨基酸序列以及任何相关的翻译后修饰 (PTM) 的质量属性中，应执行。此全面表征还应包括过程相关杂质，如来源于生产细胞的残留宿主细胞蛋白 (HCP) ，以降低免疫原性并确保 AAV腺病毒载体产品的安全性，质量和有效性。基于 LC-MS 的肽图分析通常用于重组蛋白分析，可提供序列覆盖， PTM 信息以及 HCP 的鉴定，以改进相关生产工艺的产品开发和部署。

如应用说明 腺相关病毒衣壳蛋白表征和使用微流 UHPLC-Orbitrap MS 进行宿主细胞蛋白谱图分析，通过使用用于 AAV 衣壳消化的 Thermo Scientific SMART Digest 胃蛋白试剂盒可以实现高达 100% 的序列覆盖 。此外， Thermo Scientific Hypersil GOLD C18 色谱柱是肽图分析的出色之处，因为色谱柱包含二次相互作用，可防止超纯硅胶，具有独特的孔径，有利于肽峰形。