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荧光基团的基本荧光性质——激发和发射——通常以曲线图的形式呈现。这些曲线描述了激发和发射将作为波长的函数发生的可能性,并提供了关于照射荧光基团的预期行为的重要信息。了解信息是理解荧光现象的重要一步。
激发范围和最大激发波长。A) 荧光基团的激发光谱(线)和最大激发波长(箭头)。B) 光谱的阴影区域表示荧光基团激发效率明显较低的波长。
在荧光简介——光谱及其与荧光的关系中了解更多关于激发范围和最大激发波长的信息
荧光发射以类似方式表现:荧光基团的荧光输出最可能发生在特定波长下。该波长是该荧光基团的最大发射波长。被激发的荧光基团也可以发射接近最大发射波长的光,如图所示。然而,该光强度较低。
发射范围和最大发射波长。A) 荧光基团的发射光谱(线)和最大发射波长(箭头)。B) 光谱的阴影区域表示荧光基团发射强度明显较低的波长。
重要的是要记住,尽管在荧光基团最大激发波长下进行照明能产生最大的荧光输出,但在较低或较高波长下进行照明只会影响发射光的强度,但发射曲线的范围和整体形状不会改变。如动画所示,在接近最大激发波长下,激发效率较低;但发射的荧光强度会降低。
不同波长激发对荧光基团发射的影响。图中显示了不同激发波长(A-E)下的激发输入(蓝色曲线)和发射输出(红色曲线)。 A) 在荧光基团的最大激发波长下进行激发, 会产生最大发射。B-E) 在其他次优波长下进行激发,会导致发射强度下降,与激发输入量的降低成正比。在次优激发波长下激发时,荧光基团发出荧光的波长不会发生变化,只是荧光基团发出的荧光量会减少。
在荧光简介——光谱及其与荧光的关系中了解更多关于发射范围和最大发射波长的信息
请注意,荧光基团的最大发射波长总是比最大激发波长更长,即能量更低。最大激发波长和最大发射波长之间的差异称为斯托克斯位移。斯托克斯位移的大小由荧光基团的电子结构决定,是荧光基团分子的特征。那么,是什么原因导致了这种能量损失呢?
斯托克斯位移是由于激发荧光基团的部分能量在分子激发态的短暂生命期内通过分子振动而损失。当周围的溶剂分子与激发的荧光基团碰撞时,该能量以热量的形式耗散到周围的溶剂分子中。
斯托克斯位移示意图。 当分子能级在激发过程中达到峰值时, 达到荧光基团的最大激发波长 (1)。在荧光过程中,荧光基团发射的光会损失能量 (2),从而导致最大发射波长发生位移 (3)。这个过程被称为斯托克斯位移。
总之,荧光基团的荧光激发光谱和荧光发射光谱包含关于我们需要提供和检测什么波长的光的重要实用信息,以便有效地使用该荧光基团。 此外,当选择在实验中同时使用两种或多种荧光基团时,必须仔细检查激发光谱和发射光谱,以便荧光基团的激发方式能产生不同的发射光谱。
该视频提供了完整教程。
绘制和比较光谱,并检查多种荧光基团的光谱兼容性。
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仅供科研使用,不可用于诊断目的。





