成功转染的第一步是为您的应用选择合适的转染试剂。可能需要进一步优化。下表将帮助您解决其中一些重要问题，从而让您轻松获得优异的转染结果。

有助于取得成功的转染技术

注意事项
说明
在有血清的情况下转染
  • 血清一度被认为会降低转染效率，但只要 DNA-阳离子脂质体试剂复合物在没有血清的情况下形成，转染过程中就可以有血清存在。一些血清蛋白会妨碍复合物的形成。
  • 在有血清的情况下，阳离子脂质体试剂和 DNA 的合适用量可能会发生变化；因此，如果要在转染培养基中加入血清，需要对含有血清的转染条件进行优化。
  • 大多数细胞在无血清培养基中都能保持健康数小时。
培养基中的抗生素
  • 阳离子脂质体试剂可提高细胞渗透性。这会增加递送到细胞内的抗生素量，进而产生细胞毒性。转染效率可能因此降低。因此，请勿在转染培养基中使用抗生素。
  • 将细胞铺板进行转染时，应避免使用抗生素。这样可降低在转染前冲洗细胞的需求。
  • 要实现稳定转染，请勿在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是 Geneticin® 选择性抗生素的竞争性抑制剂。
  • 创建稳定细胞系时，至少需要72小时来让细胞表达抗性基因，然后再添加选择性抗生素。
  • 如果使用无血清培养基，则抗生素用量要少于含血清培养基中的抗生素用量，以保持细胞健康。
细胞维持和培养物进化
  • 要获得理想的转染结果，请遵循常规的传代培养程序。
  • 每周进行一次或两次稀释传代培养，使其在下一次传代之前近乎汇合。
  • 不要让细胞保持汇合超过24小时。
  • 细胞培养物在实验室中经过长年累月的进化，转染相关的细胞行为也会随之变化。解冻一小瓶新细胞可恢复转染活性。
细胞铺板密度
  • 转染的最佳细胞密度因不同细胞类型或应用而异。对于贴壁细胞，转染时汇合度为 70% 至 90%，或细胞密度为 5 × 105 至 2 × 106 个悬浮细胞/mL，通常会产生良好的结果。
  • 确保细胞在转染时未完全汇合或处于固定相。
  • 由于转染效率对细胞培养的汇合度很敏感，因此所有实验均应遵守标准接种方案。
  • 在某些情况下，铺板细胞数量越多，转染活性越高。
DNA 质量
  • 高质量的完整质粒 DNA 对于实现高效转染至关重要。
  • Life Technologies 提供一系列核酸纯化试剂盒，名为
    PureLink™ HiPure 纯化试剂盒（小量、中量、大量、超大量和宏量），这些试剂盒可提供用于转染的高质量 DNA。请参阅 PureLink™ 质粒纯化试剂盒完整列表。
  • 利用氯化铯显带也可获得高纯 DNA，但耗时费力。