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Applied Biosystems TaqMan外源性内阳性对照试剂包含预先优化的内部阳性对照(IPC),并配有预设计的引物和 TaqMan 探针。该 IPC 可加入样品中,用于区分真正缺乏靶序列的阴性与因 PCR 抑制引起的阴性。
TaqMan外源性内阳性对照试剂允许在同一反应管内同时扩增 IPC 与低拷贝靶 DNA。尽管靶 DNA 与 IPC DNA 的起始拷贝数可能不同,但 IPC 引物在 PCR 反应中的浓度为限制性,从而不会削弱靶反应的扩增效率。
aqMan外源性内阳性对照试剂旨在:
区分阴性结果的类型
区分由样品缺乏靶序列引起的阴性反应与由 PCR 抑制剂存在引起的阴性反应
在同一反应中同时扩增两种 DNA
通过用 FAM 探针标记低拷贝靶 DNA、用 VIC 探针标记 IPC,可在同一反应管内同时扩增两者
防止与靶标的交叉反应
允许 IPC 与靶序列共同扩增,同时不影响靶序列的扩增性能
避免扩增内源基因
保持内源性内部对照或“管家基因”的表达稳定性
在扩增过程中,样品与 IPC 产生的报告荧光信号可用于鉴定未知样本。
阳性与阴性判定基于对两种染料通道数据的统计分析。统计分析依据无模板对照(No Template Control,NTC)和阴性内部阳性对照(Negative Internal Positive Control,IPC–)的基线,建立 FAM 与 VIC 判定阳性的阈值。
在本试剂盒中,FAM 通道显示靶模板的阳性(+)和阴性(–)判定,VIC 通道显示 IPC 的阳/阴(+ / –)判定。
如果可检测到的靶模板(FAM)判定为…… |
且可检测到的 IPC(VIC)判定为…… |
则靶模板为…… |
|---|---|---|
+ |
+ 或 –* |
存在 |
– |
+ |
缺失 |
– |
– |
无扩增 |
*在靶检测(FAM)信号强烈存在时,VIC 通道可能判定为阴性和/或出现无信号。这是由于 IPC 检测中使用的引物浓度为限制性所致。
仅供研究使用。不得用于诊断程序。