内容总结：

  1. 细胞凋亡概述和发展
  2. 凋亡研究的思路，检测方法和常见问题
  3. 凋亡检测的相关资源介绍

演讲者：何骁男 博士——赛默飞技术应用专家 负责细胞分析类产品，细胞生物学博士，毕业于中国科学院生化与细胞研究所，本科就读于南开大学。

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、病理与流式技术人员、药物筛选与机制研究学生

[00:00-07:59] 凋亡基础流程: 概念和作用及流程要点

[08:00-15:59] 凋亡与坏死区分方法: 差异和形态及注意事项

[16:00-23:59] 早期检测方法: 线粒体和膜标记及注意事项

[24:00-31:59] caspase检测流程: 抗体和底物及操作要点

[32:00-39:59] TUNEL方法和注意事项: 组织检测和背景处理

[40:00-47:59] 通路研究流程: 机制分析和文献及资源

学习目标：

  1. 掌握凋亡与坏死的关键区别及形态特征
  2. 理解凋亡早期、中期、晚期的常用检测方法
  3. 学习线粒体膜电位与Annexin V/PI的操作要点和注意事项
  4. 掌握caspase活性检测与CellEvent应用流程
  5. 理解TUNEL的组织应用与常见问题排查策略
  6. 学习外源与内源通路的关键分子及机制验证思路

基础概念：

  1. 细胞凋亡: 一种受控的程序性细胞死亡，参与发育塑形与稳态维持。
  2. 细胞坏死: 外界损伤引起的被动性死亡，伴随膜破裂与炎症反应。
  3. 线粒体膜电位: 线粒体功能指标，凋亡早期下降，可用TMRM或JC-1检测。
  4. Annexin V/PI双染: 识别磷脂酰丝氨酸外翻与膜通透性，区分早期凋亡与晚期/坏死。
  5. caspase级联: 半胱天冬酶介导的蛋白酶级联，执行凋亡效应。
  6. CellEvent染料: 被caspase切割后结合DNA发光的活体检测探针。
  7. TUNEL法: 用TdT将标记dUTP接入DNA断端，检测晚期凋亡片段化。
  8. BCL-2通路: 线粒体内源通路关键调控蛋白，影响细胞色素C释放。
  9. CHK1-ATR/ATM-caspase-2: DNA损伤相关通路，调控凋亡的机制案例中被验证。