内容总结：

  1. 细胞自噬研究背景介绍
  2. 自噬发生过程中的常用荧光成像检测解决方案的介绍。

演讲者：赛默飞世尔技术应用专家 李琳子博士

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学与细胞生物学研究人员、成像与免疫荧光实验人员、药物研发与筛选人员

[00:00-09:59] 自噬基础流程: 概念和历史及研究方向

[10:00-18:59] 自噬流方法: turnover策略和注意事项

[19:00-26:59] LC3检测方法: 抗体和融合蛋白及假阳性

[27:00-34:59] 溶酶体方法: 串联探针和pH变化及分析

[35:00-44:59] 底物检测流程: P62和AHA方法及成像

[45:00-52:00] 成像注意事项: 背景和光漂白及光毒性

学习目标：

  1. 掌握自噬三类路径及其区别
  2. 理解自噬流动态与turnover策略
  3. 掌握LC3抗体和融合蛋白检测方法
  4. 学习mRFP-GFP-LC3的pH监测原理
  5. 理解P62与AHA点击化学的应用
  6. 掌握成像背景、抗体优化与抗淬灭措施

基础概念：

  1. LC3-I/LC3-II: LC3经切割与泛素样修饰形成膜结合的LC3-II，参与自噬体形成与闭合。
  2. 自噬流（autophagic flux）: 自噬体生成与下游降解的动态平衡，需用turnover策略区分诱导与阻断。
  3. P62/SQSTM1: 自噬底物受体，一端结合泛素化蛋白，一端结合LC3，定位与聚集反映自噬状态。
  4. 自噬溶酶体（autolysosome）: 自噬体与溶酶体融合形成的酸性囊泡，执行内容物降解。
  5. mRFP-GFP-LC3串联传感器: 利用GFP在酸性淬灭、RFP稳定的特性，监测自噬溶酶体成熟与pH变化。
  6. LAMP1/LAMP2: 溶酶体膜蛋白，常用抗体进行溶酶体定位与数量变化检测。
  7. LysoTracker类染料: 小分子溶酶体染料，多通道颜色可选，用于活细胞溶酶体成像。