内容总结：

讲座系统介绍细胞培养的概念、环境与无菌操作。详述污染类型与支原体检测，及抗生素使用误区。讲解培养基成分作用、配制与保存，血清选择与热灭活流程。覆盖贴壁与悬浮细胞的复苏与传代方法、解离试剂选择，以及细胞冻存的程序降温操作与资源获取。

演讲者：彭博 博士 —— 赛默飞细胞生物学产品技术支持专家

类型: 技术讲座

难度: 基础

目标受众: 生命科学研究人员、细胞培养初学者、实验室技术人员

[00:00-09:59] 细胞培养基础流程: 概念和形态及无菌操作注意事项

[10:00-16:59] 培养环境和培养基方法: pH和CO2及成分选择注意事项

[17:00-23:59] 污染检测方法: 支原体与病毒及抗生素注意事项

[24:00-31:59] 培养基配制流程: 干粉配置和pH调节及保存注意事项

[32:00-37:59] 复苏和传代流程: 复苏步骤和贴壁传代注意事项

[38:00-36:59] 细胞冻存操作: 冻存步骤及程序降温注意事项

学习目标：

  1. 掌握细胞培养环境设置及无菌操作要点
  2. 理解细菌、真菌与支原体污染迹象和检测方法
  3. 学习培养基成分作用及选择与配制流程
  4. 掌握血清批次测试、热灭活流程和保存解冻方法
  5. 理解贴壁与悬浮细胞的复苏与传代操作及注意事项
  6. 学习细胞冻存的程序降温与液氮保存流程

基础概念：

  1. 支原体: 直径<1µm的细菌类污染，荧光染色可判定核外信号为阳性。
  2. 胰酶: 常用贴壁细胞解离试剂，需血清或抑制剂中和，消化时间需精控。
  3. HEPES缓冲剂: 稳定培养液pH的缓冲剂，建议≤25 mM以避免细胞毒性。
  4. 苯红（Phenol Red）: pH指示剂，影响雌激素相关研究与荧光成像，可选无苯红培养基。
  5. 谷氨酰胺稳定剂: 谷氨酰丙氨酰二肽形式，37℃稳定并缓释谷氨酰胺减少氨生成。
  6. 碳酸氢钠缓冲系统: 与CO2共同维持pH，空气中上调pH致培养基偏紫红。
  7. 程序降温盒: 加入异丙醇后实现约1℃/分钟降温的冻存容器。
  8. TrypLE类温和解离剂: 无动物源温和解离试剂，稳定性高且无需中和，适合敏感细胞与无血清体系。