内容总结：

  1. IP/Co-IP原理介绍
  2. 常规IP/Co-IP实验流程
  3. IP/Co-IP常见问题解答类型: 技术讲座

演讲者：赛默飞应用技术专家 王璐博士

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、分子生物学实验人员、蛋白质组学与生物化学相关从业者

[00:00-09:59] IP及Co-IP操作流程: 背景介绍和流程及区别

[10:00-16:59] 常见问题处理方法: 条带干扰和结合及分离

[17:00-25:59] 抗体固定方法: 交联法和直接法及选择

[26:00-34:59] 背景处理和分离操作: 对照及洗涤和磁珠

[35:00-41:59] 工具选择流程: 试剂选择及检测和成本

学习目标：

  1. 掌握IP与Co-IP的基本流程和区别
  2. 理解抗体重/轻链干扰的成因及解决方法
  3. 学习交联法和直接法固定抗体的应用场景
  4. 掌握设置合理对照和预清理以降低背景
  5. 理解Protein A/G/AG与磁珠/离心柱的选择策略

基础概念：

  1. 免疫沉淀（IP）: 以特异抗体固定并富集目标抗原，用Western/酶活等检测。
  2. 免疫共沉淀（Co-IP）: 抗体捕获抗原连同互作蛋白复合物，研究分子间相互作用。
  3. Protein A/G/AG: 与抗体Fc/轻链结合的亲和蛋白，依据抗体种属与亚型选择，AG为融合体覆盖面更广。
  4. DSS交联: 将抗体与载体共价固定，防止重/轻链脱落干扰检测。
  5. Clean-Blot二抗: 仅识别未变性的一抗，避免检测到IP洗脱中的抗体条带。
  6. 预清理（Preclearing）: 样品先与空树脂孵育去除非特异结合，降低背景。
  7. 磁珠分离: 利用磁力快速固液分离，减少背景并适配高通量与自动化。