内容总结：

介绍在流式平台进行单细胞RNA与蛋白共检测的PrimeFlow技术。讲解双Z探针与支化DNA信号放大原理及实验流程。说明通道与染料选择、缓冲液保护及管家基因对比。展示免疫与病毒应用案例，如IFN-γ动力学、IL-23R检测、HBV分型与HIV早期复制监测。

演讲者：王淑明 赛默飞技术支持专家

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 流式细胞术用户、免疫与病毒研究人员、分子生物学实验人员

[00:00-09:59] PrimeFlow™ RNA技术原理方法: 概念和应用概览

[10:00-16:59] 实验操作流程: 表面染色和固定及透膜

[17:00-23:59] 信号放大Amplifier 方法: 树状放大和操作视频

[24:00-31:59] 探针与通道选择: 通道选择和管家基因

[32:00-39:59] 应用案例方法: 筛选方法及病毒应用

学习目标：

  1. 掌握PrimeFlow在流式平台的基本原理
  2. 理解双Z探针与支化DNA信号放大机制
  3. 学习表面与胞内染色及固定透膜的流程
  4. 掌握通道与染料选择及注意事项
  5. 理解管家基因选择对数据比对的影响
  6. 学习在免疫与病毒研究中的应用设计

基础概念：

  1. 双Z探针: 成对寡核苷酸并排结合目标RNA，触发后续放大
  2. 支化DNA信号放大: 预放大器-放大器-标记探针形成树状结构提升信号
  3. PrimeFlow RNA: 在流式细胞术平台检测单细胞RNA并可同步检测蛋白的方案
  4. 固定与透膜缓冲液: 特殊配方保护已染抗体与荧光，允许核内杂交
  5. 管家基因: 用于表达归一化的参考基因，细胞类型间可能不均一
  6. 多色通道选择: 使用488/568/637/750四通道并配套滤镜进行多重检测
  7. RNA与蛋白共检测: 先用抗体筛选细胞亚群再测RNA或反向操作