内容总结：

本次讲座将就流式的技术原理、研究思路到应用实例等多个侧面为大家重点介绍流式细胞术在细胞功能分析中的应用，以及相关的资源分享。

演讲者：赵凯 博士——赛默飞技术应用专家

类型: 技术讲座/实验教程

难度: 基础

目标受众: 生命科学研究人员、流式细胞术初学者、实验室技术员及技术支持人员

[00:00-09:59] 原理方法: 三大系统和聚焦方法: 流式原理和FSC/SSC及流体与声波聚焦方法及注意事项

[10:00-19:59] 光路配置方法: 激光和滤光片: 多激光布局和滤光片分光镜配置及通道收集

[20:00-29:59] 染料选择流程: 类型比较和亮度: 小分子/蛋白/串联/量子点比较及染色指数计算

[30:00-39:59] 配色设计方法: Panel和补偿: Treg配色示例和补偿方法及多激光减串色

[40:00-49:59] 样本制备流程: 封闭和对照: 封闭与表面/胞内染色流程及对照设置

[50:00-59:59] 功能检测方法: 电压补偿和凋亡: 电压与微球补偿及存活增殖周期凋亡检测

学习目标：

  1. 掌握流式细胞仪流体、光路、电子学三大系统的基本原理
  2. 理解多激光光路、滤光片与二向色镜的配置方法
  3. 掌握多色panel配色原则、染色指数应用和补偿调节步骤
  4. 学习样本制备中的封闭策略与多类型对照设置
  5. 掌握细胞存活、增殖、周期与凋亡的流式检测方法与注意事项

基础概念：

  1. 流体动力学聚焦: 以鞘液包裹样品流使细胞排成单列通过激光的聚焦方式。
  2. 声波聚焦: 利用超声驻波将颗粒聚集到中心线以实现稳定居中通过的聚焦方式。
  3. FSC/SSC: 前向散射反映细胞大小，侧向散射反映细胞内部复杂度。
  4. 滤光片与二向色镜: BP/LP/SP滤光片与长通二向色镜配合实现光谱分离与通道收集。
  5. 染色指数: 阳性与阴性群体中位数差值除以阴性群体宽度衡量亮度与通道灵敏度。
  6. 补偿: 扣除荧光串色的数学校正，常用单染对照或微球设置矩阵。
  7. 串联染料（FRET）: 供体与受体荧光团基于能量转移实现大Stokes位移的染料。
  8. 量子点: 发射峰窄且亮度高的纳米半导体荧光探针，适合多色检测。