内容总结：

课程系统讲解流式表面染色，从靶标分类与marker选择到样品制备与配色。分别示范小鼠外周血和人肿瘤组织的染色流程，涵盖FC受体封闭、抗体滴定、裂红与死活染料选择。最后给出上机分析分群策略、仪器维护要点及备选检测方案。

演讲者：赛默飞技术支持专家

类型: 实验教程

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员和流式细胞术初中级使用者

[00:00-06:59] 基础介绍与样品制备流程: 靶标分类和marker选择及样品处理

[07:00-12:59] 血液样本流程: FC封闭和抗体滴定及计算

[13:00-18:59] 裂红和死活染料方法: 裂红及核酸染料和血液分析

[19:00-25:59] 肿瘤样本流程和仪器维护: 可固定染料和流程及仪器注意事项

学习目标：

  1. 掌握表面染色靶标分类与marker选择方法
  2. 理解血液与肿瘤样本的制备差异和流程
  3. 掌握FC受体封闭与抗体滴定的关键步骤
  4. 学习核酸类与可固定死活染料的选择与使用
  5. 掌握上机分析分群策略及仪器维护要点

基础概念：

  1. FC受体封闭: 封闭细胞表面FC受体，避免抗体FC段非特异结合导致假阳性和高背景。
  2. 核酸类死活染料: 如PI、7-AAD、CyTOX系列，进入死细胞结合DNA发强信号，活细胞不透；不兼容后续固定。
  3. 可固定死活染料: 蛋白反应性染料，活细胞信号弱、死细胞强；兼容固定，染色液需无叠氮钠、Tris和蛋白质。
  4. 红细胞裂解: 用氯化铵裂红液改变渗透压使红细胞胀破，常用不含固定剂的裂解液处理血样。
  5. 抗体滴定: 基于推荐用量对样本优化抗体量，如0.2 mg/mL浓度每反应0.125 µg需0.625 µL。
  6. 分群策略（gating）: FSC/SSC圈群、排除黏连与死细胞，选CD45+，再以CD3、CD4、CD8等逐层分析。
  7. MDSC细分: 小鼠用Ly6G/Ly6C区分GMDSC与MMDSC；人用CD11b、CD33并以CD14与CD15细分。
  8. OMIPS: 经同行评议的多色染色方案资源，用于marker、配色和克隆选择参考。