内容总结：

  1. 基因组编辑工作流程                                                         
  2. CRISPR 设计                                                  
  3. 基因突变的检测分析方法                                                
  4. 核酸酶修饰细胞的选择性高效培养方案
  5. Cas9 蛋白和 Cas9 mRNA的运用
  6. 双等位基因的多重高效敲除
  7. CRISPR 慢病毒文库用

演讲者：赛默飞研发科学家 杨建平 博士

[00:00-10:00] 基础流程介绍: 基因编辑原理和用途及注意事项

[10:00-18:00] 设计步骤方法: 设计工具使用和脱靶考虑

[18:00-26:00] 检测方法流程: PCR扩增和酶切分析

[26:00-34:00] 快速筛选方法: 共转染观察和细胞富集

[34:00-42:00] 递送方式操作: 转染时间和脱靶差异

[42:00-52:00] 实例和流程: IPS操作和文库筛选

学习目标：

  1. 掌握基因组编辑的基本原理与应用范围
  2. 理解NHEJ和HR两种修复路径及适用场景
  3. 学习设计软件进行靶点选择和脱靶预测
  4. 掌握剪切测量试剂盒与报告载体筛选方法
  5. 理解DNA、mRNA与蛋白递送的优缺点及脱靶差异
  6. 学习电转在IPS和难转染细胞中的应用流程

基础概念：

  1. 基因组编辑: 通过在特定位点插入、替换或删除DNA碱基以改变基因组序列的技术。
  2. 非同源性末端连接（NHEJ）: 修复DNA双链断裂的易出错途径，常导致插入/缺失，用于基因敲除。
  3. 同源重组（HR）: 利用供体DNA同源臂进行精确修复与插入，适合标签和定点改造。
  4. CRISPR/Cas9: 以向导RNA定位靶序列，由Cas9切割DNA实现编辑的系统，支持DNA、mRNA和蛋白形式。
  5. 剪切测量试剂盒: 通过PCR与错配酶切并胶分析，定量靶位点编辑效率的检测工具。
  6. 报告载体（OFP/CD4）: 含可恢复荧光和膜蛋白表达的载体，用于快速筛选与富集编辑阳性细胞。
  7. 脱靶效应: 编辑工具在非靶位点引发意外切割或变异的现象，可通过优化设计与递送形式降低。
  8. 电转（Neo系统）: 利用电穿孔递送核酸或蛋白的方式，提供多条件优化以提升难转染细胞的编辑效率。