内容总结：

  1. 瞬时蛋白表达基础
  2. CHO 中瞬时蛋白表达：ExpiCHO
  3. 相关资源

资源演讲者：何静 博士 —— 赛默飞生命科学产品与服务集团技术支持专家

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、蛋白表达与抗体研发人员、药企工艺开发工程师

[00:00-06:59] 表达体系方法: 瞬时和稳定对比及细胞系选择

[07:00-13:59] 系统优化方法: 产量提升和协同优化及注意事项

[14:00-20:59] 细胞和试剂操作: 培养基选择和辅料添加及方法

[21:00-28:59] 流程和注意事项: 三种protocol和转染配置及操作视频

[29:00-35:59] 传代流程和收集注意事项: 活力监测和收集与纯化及建议

学习目标：

  1. 掌握瞬时与稳定表达的流程差异和适用场景
  2. 理解CHO与HEK293细胞的选择依据和特点
  3. 学习新一代CHO瞬时系统的组成和作用
  4. 掌握三种protocol的温度与补料操作
  5. 学习复合物低温配置、DNA用量和轻柔混匀要点

基础概念：

  1. 瞬时表达: 通过转染短期获得蛋白，无需筛选，周期约5-7天。
  2. 稳定表达: 经筛选建立稳定高表达细胞株，周期为数月。
  3. CHO细胞: 仓鼠卵巢细胞，工业生产常用，安全性高，适合生物制剂。
  4. HEK293细胞: 人胚肾细胞，转染效率高，部分蛋白产量较高。
  5. 增强剂（enhancer）: 转染后减缓细胞增殖，提升蛋白表达的添加剂。
  6. 补料（feed）: 转染后补充营养维持高密度与活力的添加剂。
  7. 低温复育: 在冷条件快速形成复合物并5分钟内加至细胞。
  8. 摇床轨道与转速: 根据容器尺寸选择合适轨道与RPM以保障活力与气体交换。