免疫检测手段在肿瘤信号通路研究中的应用

内容总结：

1. 认识及阐明肿瘤各阶段的主要分子事件及其调控机制。
2. 如何使用Luminex技术快速高通量筛选肿瘤中差异表达分子？
3. 如何通过ELISA及其他抗体相关手段深入探讨特定分子在肿瘤发生发展中的作用及机制？

演讲者：赵凯 博士——赛默飞技术应用专家

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、肿瘤与免疫学实验人员、临床科研人员

[00:00-09:59] 背景介绍流程: 肿瘤通路与研究方法概览和注意事项

[10:00-19:59] 细胞死亡检测方法: Western和免疫荧光及指标检测

[20:00-29:59] 抗体选择方法: 一抗与二抗选择和标记注意事项

[30:00-39:59] 实验方法操作: IP、Western、免疫荧光和in-cell ELISA流程

[40:00-49:00] ELISA及多重检测方法: 夹心法与Luminex和排查要点

学习目标：

1. 掌握肿瘤信号通路与相关检测指标
2. 理解一抗与二抗选择流程和注意事项
3. 学习IP、Western、免疫荧光和流式的操作要点
4. 掌握ELISA四类方法的原理和适用范围
5. 理解ELISpot与in-cell ELISA的应用与优势
6. 学习Luminex多重检测的微球编码与读数原理
7. 掌握ELISA常见问题的排查与优化策略

基础概念：

1. 肿瘤信号通路: 肿瘤发生发展涉及的互相耦合的分子网络，包括增殖、抑制、凋亡、自噬等通路。
2. 免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（Co-IP）: 用特异抗体富集目标蛋白及其互作伙伴，用于验证蛋白相互作用。
3. ELISA（直接/间接/双抗夹心/竞争）: 以抗体-抗原特异结合实现定量检测的板上酶法，共四种常用模式。
4. ELISpot: 在单细胞水平检测细胞分泌的细胞因子或抗体的斑点法。
5. Luminex多重检测: 以编码微球包被抗体实现一次性多靶标定量的流式或成像法。
6. 重组抗体与重组二抗: 体外筛选与表达获得的克隆抗体，减少批次差异并提高特异性与低背景。
7. 二抗高交叉吸附与FAB片段: 去除跨种属反应提高特异性；FAB片段避免FC受体非特异结合。
8. 矩阵效应: 样本基质成分干扰抗原抗体结合导致定量偏差的现象。