适用于细胞治疗应用的稳健 PSC 贴壁细胞培养

CTS StemFlex Medium product photo

Gibco CTS StemFlex 培养基是一种无异源成分的培养基 ，支持无饲养层多能干细胞 (PSC) 的稳健扩增，并且可支持临床转化和生产中的困难应用，包括基因编辑，克隆扩增和单细胞传代。

  • 困难应用中的可靠性能—在基因编辑后实现快速复苏和高效克隆扩增
  • PSC 的稳健扩增—维持稳定的核型，多能性和分化潜能，最多达 >10 代
  • 简化的工作流程—同时适用于高效的细胞扩增和改造，降低成本和手工操作时间
  • 专为细胞治疗的生产而设计 * —通过 GMP 生产，大量的安全性测试，原材料的可追溯性以及监管文件来支持监管备案

立即订购

本页内容：

在困难应用中实现可靠的性能

基因编辑技术可以产生逃避免疫排斥的低免疫细胞或通过纠正基因缺陷达到治疗目的，从而为基于 PSC 的疗法提供了巨大的潜力。PSC 中基因编辑的工作流程如 图 1 所示。 电穿孔和单细胞克隆扩增后的 PSC 复苏可能具有挑战性，需要一种能够在整个过程中维持细胞高活力和多能性的培养基。CTS StemFlex 培养基支持困难应用中高质量 PSC的维持培养。

图表
图1.获得 CRISPR/Cas9 基因编辑的 PSC 的工作流程。


基因编辑后的细胞高效复苏

CTS StemFlex 培养基的优化配方支持在通过电穿孔引入 Cas9 复合物后的 PSC复苏 (图 2A 和 2B )。CTS StemFlex 培养基还可保持高水平的多能性，并提供类似于科研级别 (RUO) StemFlex 培养基 (图 2C 和 2D) 的编辑效率。

results from Cas9 complex delivery

图2.CTS StemFlex 能够实现基于电穿孔的靶向 CIITA 基因的 CRISPR Cas9 gRNA 复合物递送。CTS StemFlex 培养基支持基因编辑后的高效复苏效率，如 (A) 汇合度和 (B) 电穿孔后传代的细胞数量变化所示。(C) 细胞还通过流式细胞术分析 OCT4 和 NANOG 标记物来评估多能性的高表达水平。(D) RUO StemFlex 和 CTS StemFlex 培养基通过在 Citta 靶标上的新一代测序 (NGS) 实现了相近的编辑效率。


高效克隆扩增效率

电穿孔后，编辑过的 PSC 克隆可以在 CTS StemFlex 培养基中高效扩增 (图 3A 和 3B) ，维持了多能性 (图 3C) 或基因组稳定性 (图 3D)。

Data of clonal expansion following electroporation
图3CTS StemFlex 培养基支持CIITA 基因编辑的 PSC 阳性克隆扩增。


单细胞传代的稳健复苏

在 CTS StemFlex 培养基中培养的 PSC 与RUO StemFlex中培养的PSC有相似的细胞高活力和累积扩增倍数 (图 4A)此外，在 CTS StemFlex 培养基中扩增的 PSC 在连续单细胞传代后维持多能性和 基因组稳定性 (图 4B 和 4C)。

Data for expansion and pluripotency markers
图 4.CTS StemFlex 提供一致的扩增能力，并在连续单细胞传代过程中维持多能性和基因组稳定性。(A) PSC 在 10 次单细胞传代中表现出一致的累积倍数扩增，类似于 RUO StemFlex 培养基。这些 PSC 还 (B) 保持了流式细胞术评估的 OCT4 和 NANOG 多能性标记物的高表达，并且 (C) 在 10 次单细胞传代后通过 KaryoStat 检测评估保持基因组稳定性。

高质量PSCs的一致扩增

CTS StemFlex 培养基可促进长期培养中的一致生长，同时还 在多种 PSC 细胞系中保持正常形态 (图 5A) ，多能性 (图 5B 和 5C) 和基因组稳定性 (图 5D)。

Data for expansion and pluripotency markers

图5.CTS StemFlex 培养基可在长期培养中维持正常的形态，多能性和核型。(A) 在 CTS StemFlex 培养基中培养的 PSC 表现出典型的 PSC 形态。在 CTS StemFlex 培养基中的长期培养过程中维持多能性。在 >10 次传代  中生长的 PSC在 (B) 流式细胞术分析和 (C) 采用免疫组化染色中均显示出多能干细胞标志物的高表达。 (D) CTS StemFlex 支持通过 KaryoStat 检测确认的长期培养中的基因组稳定性。

三胚层分化潜能

在 CTS StemFlex 培养基中可实现 PSC 长期扩增，并维持扩增潜力，多能性或基因组稳定性 (图 5)此外， PSC 保持了分化到所有三个胚层的能力 (图 6)

gene-expression plots for differentiation markers

图6.三系分化潜能 使用 CTS Essential 6 培养基自发分化 ESC (A) 和 iPSC (B) 为胚状体使用 TaqMan® hPSC Scorecard 检测试剂盒分析基因表达，表现出外胚层，中胚层和内胚层标记的上调

从 RUO StemFlex 培养基过渡到 CTS StemFlex 培养基

Gibco 细胞治疗系统 (CTS) 产品可提供按 GMP 标准生产的高质量辅助材料，帮助促进从早期研发到临床和商业生产的过渡。CTS产品符合广泛的原材料质量法规规范，可追溯，并随附监管文件。

CTS StemFlex 培养基的配方与科研级别 (RUO) StemFlex 培养基相似，更符合相关法规监管规范。使用相同的方案， CTS StemFlex 培养基可提供与 RUO StemFlex 培养基相当的性能，包括细胞得率(图 7A) 以及多能性标记物的表达 (图 7B) ，并且可用于临床 PSC 扩增，以支持 PSC 衍生治疗开发。

data for culture confluency and marker expression
图7.PSC 可过渡至 CTS StemFlex 培养基。从RUO StemFlex 培养基过渡到 CTS StemFlex 培养基后， PSC 维持 (A) 一致生长和 (B) OCT4 和 NANOG 多能性标志物的高表达。建议在 CTS StemFlex 培养基中培养至少 2 代帮助细胞适应新体系。

切换到悬浮培养

对于 PSC 的大规模扩增，可以首选悬浮培养体系。在 CTS StemFlex 培养基中培养的细胞可过渡到 CTS StemScale PSC 悬浮培养基中的悬浮培养。在适应 CTS StemScale 培养基后， PSC 容易聚集成高质量的球状体 (图 8A) ，这保持了扩增潜力 (图 8B) 和高水平的多能性 (图 8C)。

microscopic view of spheroids and expansion data

图8.将适应 CTS StemFlex 培养基的 PSC 过渡到悬浮培养。用 CTS TrypLE Select 解离CTS StemFlex 培养基中的贴壁 PSCs ，并接种在 CTS StemScale PSC 悬浮培养基中以获得 PSC 球状体。这导致形成具有圆形形态 (A 和 B) 的高质量 PSC 球状体一致扩增 (C) 并维持多能性 (D)。

订购信息

CTS 质量Gibco CTS 产品在生产质量标准均符合医疗器械 cGMP（21 CFR 第820部分）要求的工厂内生产。我们已在 FDA 注册的生产工厂经过 ISO 13485 认证。特定的预期使用声明，完整的文档可追溯性，以及访问药品主文件（DMF）都适用于CTS StemFlex 培养基

相关资源

相关支持

本页上所述产品的预期用途各不相同。关于特定的预期用途声明，请参见产品标签。