DNA 定量解决方案常见问题解答

是的，这两种试剂盒均在全球范围内销售。

这两种试剂盒均有 400 次反应规格可供选择，与 Quantifiler® Human, Male Y 和 Duo 试剂盒类似。我们改进了试剂盒包装，以帮助实验室尽可能减少污染并方便进行自动化功能。我们现提供四支充分过量灌装的 100 次反应混合物试管而不是一瓶反应混合物，可方便地将一支试管用于一个 96 孔定量板。

我们还将 DNA 标准品包装在单独的纸盒中。装有反应混合物和 DNA 标准品的纸盒一起放在一个具有即撕即贴条码标签的套筒中，与 GlobalFiler™ 试剂盒类似。这使得您能够更容易地跟踪试剂批号以及在抵达实验室后分离试剂进行储存。

Quantifiler® Trio 试剂盒中添加了一个额外的大常染色体 (LA) 靶点，作为降解指数特征。这一标记加上改进的小常染色体 (SA) 和男性靶点，使得 Trio 试剂盒中具有三个不同的定量检测靶点，而 Quantifiler® Duo 试剂盒只有两个靶点：一个常染色体和一个男性靶点。

Quantifiler® Trio 试剂盒具备的新降解指数功能可实现对样品质量的更全面监测（降解和抑制），该试剂盒还具有更高的灵敏度和耐用性，能够更好地与最近发布的 Applied Biosystems® STR 化学试剂（例如 Identifiler® Plus、NGM SElect™ 和 GlobalFiler™ PCR 扩增试剂盒中的试剂）兼容。

“HP”代表“Human Plus”，因为该试剂盒是 Quantifiler® Human 试剂盒的升级版。与 Quantifiler® Human 试剂盒一样，新的 Quantifiler® HP 试剂盒可检测和定量人类 DNA（无男性靶点），但新的试剂盒还包括一个大常染色体 (LA) 靶点，能够实现降解指数功能和更全面的样品质量评估。它还具有更高的灵敏度和耐用性，能够更好地与最近发布的 Applied Biosystems® STR 化学试剂（例如 Identifiler® Plus、NGM SElect™ 和 GlobalFiler™ PCR 扩增试剂盒中的试剂）兼容。

质量指数是衡量样品降解（降解指数）和抑制 (IPC) 的一个指标。降解指数是指样品显示测得的大 DNA 片段数量相较于小 DNA 片段数量减少时观察到的数据。在 Quantifiler® HP 和 Trio 试剂盒中，可通过比较小常染色体 (SA) 和大常染色体 (LA) 靶点的定量结果来测量降解指数，并用作 STR 反应中大 DNA 片段与小 DNA 片段相比是否可能表现不佳的通用指标。

法医案件检材通常含有可能干扰 PCR 扩增的抑制剂。Quantifiler® HP 和 Trio 试剂盒设计具有的抑制剂耐受性是 Quantifiler® Duo 试剂盒的约 5 倍，这些试剂盒与最近发布的高度耐用的 Applied Biosystems® STR 化学试剂（如 Identifiler® Plus、NGM SElect™ 和 GlobalFiler™ PCR 扩增试剂盒中的试剂）更兼容。*降解指数会受到 LA 靶点降解程度以及 PCR 抑制剂存在情况的影响，因此，评估降解指数时一定要结合 HID 实时荧光定量 PCR 软件中的内部 PCR 对照 (IPC) 结果，从而确定总体样品质量以及在 STR 分析期间尽可能提高数据恢复能力的较好方法。*

这些新的试剂盒大致循环时间仅 60 分钟，比上一代的 Quantifiler® 化学试剂快约 33%，并且可在单次反应中提供有关样品数量和质量的更多信息。新的质量指数提供了对样品质量（降解和抑制情况）的更全面监测，可促进有关如何进行 STR 反应以实现较好数据恢复的前期决策。

同样，提高 DNA 亚皮克级水平的灵敏度可实现对 DNA 含量不足以进行 STR 和/或 Y-STR 分析的样品进行更准确的鉴定，从而为实验室节省宝贵时间和资源。

每款新试剂盒都包含更新的灵活样品处理方案；减少标准曲线点、每次运行可处理更多样品；更快地获得结果，循环时间缩短 33%。新 HID 实时荧光定量 PCR 软件 v1.2** 的主要特点包括可配置的 Quantifiler® 模板、数据质量评估和一体式样品归一化/STR 反应构建工具，可实现从定量测定到 STR 分析的简化、迅速样品处理。

内部验证数据表明，Quantifiler® HP 和 Trio 试剂盒的检测极限为 ~1/10 个细胞当量 (<1 pg/µL)，与上一代 Quantifiler® 试剂盒相比，其灵敏度明显提高 (>6x)。可通过使用多拷贝靶点基因座实现与单拷贝检测靶点相比更高的检测灵敏度。Quantifiler® HP 和 Trio 试剂盒的靶点可针对具有挑战性的低浓度样品实现尽可能高的定量测定灵敏度，包括在存在高浓度女性 DNA 的情况下使用改进的男性靶点（在 Trio 试剂盒中）可为含有低浓度男性 DNA 的样品提供更准确的结果。

此外，这些多拷贝靶点基因座经过精心选择，通过使用强大的生物信息学工具和大量的研发测试，可尽可能减少个体与群体之间的拷贝数变异。提高 DNA 亚皮克级水平的灵敏度并结合高重现性，使实验室能够更加准确、可靠地识别并筛选所含 DNA 含量不足以进行 STR 和/或 Y-STR 分析的样品，为实验室节省宝贵时间和资源。

Quantifiler® HP 和 Trio 化学试剂的较高耐用性（灵敏度、抑制检测和 M:F 比）主要是为了与最近发布的高耐用性 Applied Biosystems® STR 试剂盒配合使用时能够与下游结果更好地兼容。这些产品包括 Identifiler® Plus、NGM SElect™、Yfiler® Plus 和 GlobalFiler™ 试剂盒。

Quantifiler® Human, Male 和 Duo DNA 定量测定试剂盒在抑制检测方面更接近传统的 Identifiler®、Profiler®、COfiler®、SGMPlus® 和 Yfiler® 试剂盒，但没有提供关于 DNA 降解的任何信息。HID 实时荧光定量 PCR 软件 v 1.2 支持所有目前可用的 Applied Biosystems® STR 试剂盒和 Quantifiler® 化学试剂的设置和分析。

Quantifiler® HP 和 Trio 试剂盒都设计有两个人类常染色体靶点：一个小常染色体 (SA) 靶点和大常染色体 (LA) 靶点。两个靶点都可为样品提供定量结果；然而，随着降解增加，较长靶点扩增子往往相对于较短靶点扩增子不成比例地减少。LA 扩增子和 SA 扩增子的相对量可帮助用户确定可能的样品降解。这一结果被称为降解指数。

小常染色体 (SA) 靶点被用作定量测定的主要靶点标记，因为 DNA 降解和抑制可能影响大常染色体 (LA) 靶点的定量。

是的，我们使用更低浓度（100 ng/μL，Duo 试剂盒标准品为 150 ng/µL）的低分子量混合基因组男性 DNA 以及改进的生产 QC 流程，提高了 DNA 标准品的均一性和稳定性。为提高制备的标准品稀释液的稳定性，我们建议将制备的标准品储存在低结合试管中，例如 Applied Biosystems® Nonstick RNase-free 微量离心管（1.5 mL，目录号 AM12450）。稀释的 DNA 定量测定标准品可在 2-8°C 条件下储存长达 2 周。

是的，Quantifiler® HP 和 Trio 试剂盒的推荐连续稀释液已从 8 个浓度点降低到 5 个浓度点。与之前的试剂盒相比，该改进措施是为了响应标准曲线中信息量更高的点以及更高样品处理量的要求。这一变化可实现每块 96 孔板多处理约 6% 的样品。（注：处理更高浓度的样品可添加一个可选的 100 ng/μL 标准点。有关更多信息，请参阅用户指南。）

从人类 DNA 浓度中减去男性 DNA 浓度，可以得到女性 DNA 浓度的近似值。

我们使用 20 pg/µL 男性 DNA 对高达 1:4,000 的男性女性 DNA 比进行了评估，并且能够准确定量测定男性和女性 DNA 组分。

是的，新软件可在 Windows® XP SP3 和 Windows® 7 SP1（64 位和 32 位）上运行。

新的 Quantifiler® Trio 和 HP 试剂盒以及 HID 实时荧光定量 PCR 分析软件 v1.2 经过验证，可在 Applied Biosystems® 7500 实时荧光定量 PCR 系统上运行。***

该软件设计用于仪器计算机和独立台式计算机，它们必须满足以下系统要求：

推荐要求

Pentium® 4 或兼容处理器，2.0 GHz（最低 1.2 GHz）

• 1 GB RAM
• 一个 10 GB 硬盘驱动器
• 20/48X IDE CD-ROM 驱动器
• USB v2.0（最低 v1.1）
• 以太网络接口适配器 (10BASE-T)

兼容的操作系统

• Microsoft Windows® 7
• Microsoft Windows® XP, Service Pack 3

固件

• 用于 7500 的 Gv2.10

HID 实时荧光定量 PCR 软件 v1.2 经完全验证可用于人类身份鉴定，并且与 Microsoft Windows® 7 兼容。关键的工作流程特点包括可配置的 Quantifiler® 模板以及仪器校准、数据质量评估和一体式样品归一化/STR 反应构建工具，可实现从定量测定到 STR 分析的简化、迅速样品处理。它可以自动计算降解指数、男性:女性混合物比例和稀释值，还包括许多可定制的数据质量标记，可用于快速数据审核。它还能将您的定量测定工作流程与自动化移液工作站和 Applied Biosystems® 7500 实时荧光定量 PCR 系统相结合，实现更快、更简化的反应构建。HID 实时荧光定量 PCR 软件采用与 SDS v1.2.3 软件不同的分析算法。在我们的内部比较测试中，与 SDS v1.2.3 软件相比，HID 实时荧光定量 PCR 软件生成的 CT 值存在具有统计学意义的差异。

除了新的降解指数和 Microsoft Windows® 7 支持外，新的软件经过优化，可与 Quantifiler® Trio 和 HP 试剂盒以及我们最新的 STR 试剂盒配合使用，例如 GlobalFiler™ PCR 扩增试剂盒。

是的，v1.2 可以与之前发布的 Quantifiler® 试剂盒配合使用。

是的，新 HID 实时荧光定量 PCR 分析软件 v1.2 可读取和重新分析先前版本的 HID 实时荧光定量 PCR 分析软件生成的数据文件。

开发了 Quantifiler® Trio 和 HP 试剂盒并使用 HID 实时荧光定量 PCR 软件 v1.2 进行了验证。该软件可确保新 Quantifiler® Trio 和 HP 试剂盒特定功能达到理想性能，例如自动计算 M:F 比、降解指数和最新 STR 分析试剂盒（包括 Identifiler Plus™、NGM Select™ 和 GlobalFiler™ 试剂盒）的简化设置。

该软件设计为一体式解决方案，可与 7500 实时荧光定量 PCR 系统（用于人类身份鉴定）以及最新一代 Applied Biosystems® STR 试剂盒和 Quantifiler® 化学试剂配合使用。它也可以作为独立软件安装用于分析。

不需要，Microsoft Windows® XP 和 7 均支持该软件，因此您可以在当前的 XP 平台上继续运行该仪器。但是，由于 Microsoft 已停止支持 XP 平台，我们将无法为您提供支持 Windows® XP 的更换计算机，因为将来购买用于人类身份鉴定的 7500 实时荧光定量 PCR 系统时都将随附 Microsoft Windows® 7。

不需要。如果您的仪器计算机是经验证的型号之一——Dell XE tower、Dell E6520 或 E6530——则无需购买新的计算机。

自动化整合是通过将 Quantifiler® Trio 和 HP 试剂盒自动化友好型捆绑与 HID 实时荧光定量 PCR 分析软件 v1.2 组合来实现的，该设计目的是帮助在常用自动化平台上实现自动化。此外，我们的人类身份鉴定专业服务 (HPS) 团队在开发定制化自动脚本和开展现场确认和验证测试方面拥有丰富的专业知识，能够帮助您在各类平台上实现理想性能。HPS 团队已经为 Quantifiler® Trio 和 HP 试剂盒开发了几种较常见的自动化平台的脚本，并且乐意向您的实验室提供有关如何在您的工作流程中高效实施这些解决方案的咨询。请联系您当地的人类身份鉴定 (HID) 客户经理以了解更多信息。