快速评价 RNA 的完整性和质量

Qubit RNA IQ 检测的开发是为了快速评价 RNA 样本的完整性和质量 (IQ)。它使用两种染料：一种结合较大的完整和/或结构化 RNA，而另一种结合较小的降解 RNA。

RNA 质量检测

产品

检测数

货号

Qubit RNA IQ 检测试剂盒

75

Q33221

275

Q33222

Qubit RNA IQ 标准品

1 套

Q33235

操作方案简单

若要进行 Qubit RNA IQ 检测，仅需向 RNA IQ 工作缓冲液中加入最低至 1 µL 的样本（含 0.5-1.5 μg RNA），并可在 Qubit 4 或 Qubit Flex 荧光仪上测定即可。此检测无需特殊处理、繁琐的样本制备或等待结果。样本的 IQ 评分是一个介于 1 和 10 之间的数值，代表样本中的大小 RNA 分子的百分比。

Qubit RNA IQ 检测结果

 

RNA IQ 评分是一个从 1 至 10 的数值，类似于其他 RNA 质量评分。这一评分基于一种专有算法，代表了样本中结构化大 RNA 分子与小 RNA 分子的比例。低评分 (A) 表明样本主要由小 RNA 分子组成，而高评分 (B) 表明样本主要由结构化大 RNA 分子组成。

如上表所示，与 Agilent™ Biozer™ 系统等其他方法相比，Qubit RNA IQ 检测更加简单、快捷。此外，Qubit RNA IQ 评分与 RT-qPCR RNA 质量测定结果的一致性要优于 Bioanalyzer 的 RNA 完整性数 (RNA)，如样本数据页面所示。

使用 Qubit RNA IQ 检测和 Agilent Bioanalyzer 测量 RNA 样品质量的方案

仪器与检测

Qubit 4 荧光仪及 Qubit RNA IQ 检测

 Agilent 2100 Bioanalyzer™  检测仪和 RNA 纳米芯片*

检测所需设备及试剂*

Qubit 4 荧光仪

Agilent 2100 Bioanalyzer 检测仪

Qubit RNA IQ 检测试剂盒

RNA 6000 Nano 检测试剂盒

 移液器

移液器

Qubit 检测管

微量离心管

 

芯片注胶平台

 

IKA 涡旋仪

 

小型离心机

 

计算机

 

热盖仪或水浴

 

不含 RNA 酶的水

设备设置

打开 Qubit 4 荧光仪

依次用新 DNA 试剂盒替换芯片注胶平台上的注射器

调整芯片注胶平台的底盘

调整芯片注胶平台的注射器夹

调整 Bioanalyzer 芯片选择器

设置涡旋混合仪

加载芯片前启动软件

样品制备时间：

~5 分钟

~30-45 分钟

样本制备

1.添加 RNA IQ 染料到 RNA IQ 缓冲液中以制备 Qubit RNA IQ 工作缓冲液

1.制备 RNA 分子量大小标记

2.添加样本 [1-20 μL (0.5­–1.5 μg)] 和标样到 Qubit RNA IQ 工作溶液中

2.制备凝胶 （包含10 分钟离心的步骤）

 

3.制备凝胶染料预混液 （包含10 分钟离心的步骤）

 

4.加载凝胶染料预混液到芯片中

 

5.加载标志物到芯片中

 

6.加载 RNA 分子量大小标记和样本（包含 1 分钟 IKA 涡旋的步骤） 

样本稳定性

~1 小时 

在 5 分钟内使用芯片

分析运行时间

每样品 <4 秒

每芯片 30 分钟

常规维护

无

每月需要进行密封性测试以检测芯片注胶平台的性能

电泳检测方法：每日使用电极清洁器清洁电极

每月通过使用牙刷及蒸馏水彻底清洁电极

每月一次（或在任何液体溅落后）用异丙醇清洁聚焦滤镜

维护所需产品

无 

RNaseZAP（电极清洁）

* 相关信息汇总自 Agilent G2938-90037 和 G2946-90003 用户手册以及 Thermo Fisher Scientific MAN0017210 快速参考卡片。

样本数据

这一数据示例表明，Qubit RNA IQ 检测中的两种试剂分别对大 RNA 分子和小 RNA 分子具有高度特异性，而 RNA IQ 评分会随大 RNA 分子百分比的增加而相应增大。

适用于大小 RNA 分子的 RNA IQ 检测试剂的选择性

在 Qubit 4 荧光仪上使用 Qubit RNA IQ 检测分析含 100 ng/mL rRNA（大肠杆菌）和不同浓度 (0–50 ng/µL) siRNA 的 3 个重复样本样本。显示这些样本的 (A) 相对荧光单位 (RFU) 和 (B) IQ 评分的图。数据表明，染料分别特异于大 RNA（如 rRNA）和小 RNA（如 siRNA）分子，且 IQ 评分与样本中大 RNA 分子的百分比密切相关。

该数据示例表明，当暴露于 RNase A 时，RNA 样品会随着时间推移降解，且 RNA IQ 评分降低。正如我们预计的那样，更高剂量的 RNase A 可加速降解。

由 Qubit RNA IQ 检测测量的 RNase A 对 rRNA 降解的时间趋势

将 100 ng/mL rRNA 溶液的 3 个重复样本与不同数量的 RNase A 在含多个染料和检测缓冲液的最终检测溶液中一起培养。 (A)  RNA IQ 评分反映出高量 RNase A 会在 60 分钟内加速 RNA 的降解。 (B)  暴露于 10 FM RNase A 下会导致一小时内大 RNA 分子的荧光逐渐下降，而小 RNA 分子的荧光会相应增加。 (C)  在 100 FM RNase A 下，这些变化的速度更快。

组合使用 Qubit 荧光仪与 NanoDrop 紫外荧光法以测定 RNA 的数量、质量和纯度

任何 RNA 分析的可靠性和可重复性都取决于已知质量、浓度及纯度的 RNA。组合使用基于 Qubit 4 或 Flex 荧光仪的 Qubit RNA IQ 检测与基于 NanoDrop 分光光度计的紫外吸光度测量，是评价 RNA 样本质量、浓度以及纯度的快速、简便方法。

NanoDrop 分光光度计只需 1 µL 样本。仅需简单测量 3 次，您就可以测得样本中的总核酸 (260 nm)、所有蛋白质污染物 (280 nm) 以及所有苯酚或其他溶剂污染物 (230 nm) 的量。

Qubit RNA XR（扩展范围）、 BR（宽范围）和 HS（高灵敏度）检测都可用于 RNA 的定量。这些检测中包含有可与完整 RNA 特异性结合的染料，因而可用于纯 RNA 样本或含在 260nm 下也有吸光值的 DNA 的 RNA 样本。

仅供科研使用。不可用于诊断程序。