Invitrogen Stealth RNAi siRNA 采用下一代 RNAi 化学成分，在明确测试条件下，其特异性以及血清和细胞培养稳定性相较于标准 siRNA 有所提升。这种化学成分在消除不必要的脱靶效应的同时产生更清晰的结果，实现：

Stealth RNAi siRNA 采用极严格的质量控制标准制造。每个单链 RNA 寡核苷酸均通过质谱分析，然后退火并提供指定数量的双链。如需订购您的基因特定的 Stealth RNAi 试剂，请使用下方的搜索工具。

订购您的 Stealth RNAi siRNA 阳性和阴性对照

Stealth RNAi siRNA 阳性对照
Stealth RNAi siRNA 阴性对照品

Stealth siRNA 下一代化学成分的优点

Stealth RNAi siRNA 提供有效敲低效率，以确保靶标基因的沉默。图1显示了 Stealth RNAi 和未修饰 siRNA 之间的沉默比较，Stealth RNAi 具有以下功能保证：倘若您实验的转染效率至少为 80%，对于每种基因，3种试剂中的至少2种将使够实现至少 70% 的转录物敲低。了解我们的功能保证的更多信息。

比较标准品和 Stealth RNAi siRNA 的 p53 基因沉默效果的柱状图
图1.使用 Invitrogen Lipofectamine 2000 递送的 siRNA 和 Stealth RNAi siRNA 可减少 A549 细胞中 p53 的表达。相应的对照包括化学成分匹配且碱基对成分类似的随机序列。p53 表达的减少表现为标准化为 GAPDH 的 p53 的表达倍数变化（相对于实时荧光定量 PCR 测量的相应对照品）。

当 siRNA 与非靶向基因足够同源时，会发生脱靶效应，从而使其与预期靶标沉默。Stealth RNAi 可有效降低使用传统 siRNA 导致的正义链介导的脱靶效应发生概率。这些问题可能是由于未修饰 siRNA 的正义和反义链都能进入 RNAi 通路所引起。但 Stealth RNAi 修饰只允许反义链有效进入 RNAi 通路。这种修饰消除了对正义链脱靶效应的担忧。

比较 Stealth RNAi 和标准 siRNA 的靶标基因特异性的柱状图。

图2. Stealth RNAi siRNA 表现出更高的靶标特异性。

与传统、未修饰的 siRNA 相比，Stealth RNAi 修饰还能提高稳定性。传统 siRNA 在含核酸酶的血清中随时间降解，因而它们不适合用于动物。

但是，Stealth RNAi siRNA 可稳定长达72小时（图3），因而成为涉及使用动物模型的项目的更好选择。这种灵活性可以节省数周时间，免却了为动物研究和细胞培养工作开发和测试不同分子的需要。

与使用变性 PAGE 的标准 siRNA 相比，Stealth RNAi siRNA 稳定性提高多达72小时
图 3. Stealth RNAi siRNA 在血清中比标准 siRNA 更稳定。在 10% 小鼠血清中孵育后0、4、8、24、48、72小时的未修饰 21-mer dsRNA 序列（左图）和相应的 Stealth RNAi siRNA 序列（右图）。孵育样品后，在 Invitrogen Novex 15% TBE-尿素聚丙烯酰胺预制凝胶上分离。

使用标准 siRNA 的研究表明，未修饰 siRNA 可以诱导细胞应激反应通路，如可导致生长抑制和细胞毒性的干扰素反应。这使得很难评估观察到的细胞表型是非特异性应激反应还是靶向基因的功能丧失所导致。Stealth RNAi 消除了 PKR/干扰素反应通路的诱导发生，有助于获得更清晰的RNAi实验结果（图4）。使用 Stealth RNAi 可实现强大的基因敲低而无激活细胞应激反应的风险，细胞应激反应会导致结果难以解释。

siRNA 和对照品的柱状图，其显示 Stealth RNAi siRNA 的干扰素反应极小（与标准 siRNA 对应物相比）
图4. Stealth RNAi siRNA 避免干扰素反应基因的诱导。在送入 A549 细胞后，siRNA 序列诱导多种干扰素基因。siRNA 序列相同的 Stealth RNAi siRNA 型号不会改变干扰素反应基因的表达。

siRNA 试剂的储存和稳定性：

在 –20°C 以干燥颗粒形式储存，直至使用。一旦重悬，请在 –20°C 下储存并避免与 RNase 接触。在 -20°C 下储存至少一年。

重悬 siRNA

根据图表在 DEPC 处理过的水中重悬 siRNA 或 Stealth RNAi 双链，以制备 20 µM 溶液。将缓冲溶液脱水制备 RNA 寡核苷酸。重悬至 20 µM 会将缓冲液复溶为 10 mM Tris-HCl (pH 8.0)、20 mM NaCl 和 1 mM EDTA。

交货数量/纯度重悬方案
20 nmole 脱盐将 20 nmole 产物重悬于 1000 µl 不含 Rnase 水中，以制备 20 µM 溶液。
80 nmole 脱盐将 80 nmole 产物重悬于 800 µl 不含 Rnase 水中，以制备 100 µM 溶液。按 1:5 比例稀释以制备 20 µM 工作储备液。
1.0 µmole 脱盐将 1 µmole 产物重悬于 1 ml 不含 Rnase 水中，以制备 1mM 溶液。按 1:50 比例稀释以制备 20 µM 工作储备液。

Stealth RNAi 和 siRNA 转染浓度

Stealth RNAi siRNA 或 siRNA 双链的转染浓度通过将所用摩尔量除以取决于最终转染体积（即起始培养基体积加转染混合物体积）确定。使用强效 siRNA 时，我们通常通过针对24孔板中的每个孔向 500 µL 培养基（最终浓度 0.8 - 8 nM）中加入 100 µL 转染混合物来转染 0.5 – 5 pmol。要按比例放大，请增加 siRNA 数量使其浓度不变。我们建议使用能够敲低您基因的最低 siRNA 量，以避免任何非特异性或脱靶效应。
有效
敲低

Stealth RNAi siRNA 提供有效敲低效率，以确保靶标基因的沉默。图1显示了 Stealth RNAi 和未修饰 siRNA 之间的沉默比较，Stealth RNAi 具有以下功能保证：倘若您实验的转染效率至少为 80%，对于每种基因，3种试剂中的至少2种将使够实现至少 70% 的转录物敲低。了解我们的功能保证的更多信息。

比较标准品和 Stealth RNAi siRNA 的 p53 基因沉默效果的柱状图
图1.使用 Invitrogen Lipofectamine 2000 递送的 siRNA 和 Stealth RNAi siRNA 可减少 A549 细胞中 p53 的表达。相应的对照包括化学成分匹配且碱基对成分类似的随机序列。p53 表达的减少表现为标准化为 GAPDH 的 p53 的表达倍数变化（相对于实时荧光定量 PCR 测量的相应对照品）。
更高
特异性

当 siRNA 与非靶向基因足够同源时，会发生脱靶效应，从而使其与预期靶标沉默。Stealth RNAi 可有效降低使用传统 siRNA 导致的正义链介导的脱靶效应发生概率。这些问题可能是由于未修饰 siRNA 的正义和反义链都能进入 RNAi 通路所引起。但 Stealth RNAi 修饰只允许反义链有效进入 RNAi 通路。这种修饰消除了对正义链脱靶效应的担忧。

比较 Stealth RNAi 和标准 siRNA 的靶标基因特异性的柱状图。

图2. Stealth RNAi siRNA 表现出更高的靶标特异性。

更好
稳定性

与传统、未修饰的 siRNA 相比，Stealth RNAi 修饰还能提高稳定性。传统 siRNA 在含核酸酶的血清中随时间降解，因而它们不适合用于动物。

但是，Stealth RNAi siRNA 可稳定长达72小时（图3），因而成为涉及使用动物模型的项目的更好选择。这种灵活性可以节省数周时间，免却了为动物研究和细胞培养工作开发和测试不同分子的需要。

与使用变性 PAGE 的标准 siRNA 相比，Stealth RNAi siRNA 稳定性提高多达72小时
图 3. Stealth RNAi siRNA 在血清中比标准 siRNA 更稳定。在 10% 小鼠血清中孵育后0、4、8、24、48、72小时的未修饰 21-mer dsRNA 序列（左图）和相应的 Stealth RNAi siRNA 序列（右图）。孵育样品后，在 Invitrogen Novex 15% TBE-尿素聚丙烯酰胺预制凝胶上分离。
更低细胞
毒性

使用标准 siRNA 的研究表明，未修饰 siRNA 可以诱导细胞应激反应通路，如可导致生长抑制和细胞毒性的干扰素反应。这使得很难评估观察到的细胞表型是非特异性应激反应还是靶向基因的功能丧失所导致。Stealth RNAi 消除了 PKR/干扰素反应通路的诱导发生，有助于获得更清晰的RNAi实验结果（图4）。使用 Stealth RNAi 可实现强大的基因敲低而无激活细胞应激反应的风险，细胞应激反应会导致结果难以解释。

siRNA 和对照品的柱状图，其显示 Stealth RNAi siRNA 的干扰素反应极小（与标准 siRNA 对应物相比）
图4. Stealth RNAi siRNA 避免干扰素反应基因的诱导。在送入 A549 细胞后，siRNA 序列诱导多种干扰素基因。siRNA 序列相同的 Stealth RNAi siRNA 型号不会改变干扰素反应基因的表达。
处理和
重悬

siRNA 试剂的储存和稳定性：

在 –20°C 以干燥颗粒形式储存，直至使用。一旦重悬，请在 –20°C 下储存并避免与 RNase 接触。在 -20°C 下储存至少一年。

重悬 siRNA

根据图表在 DEPC 处理过的水中重悬 siRNA 或 Stealth RNAi 双链，以制备 20 µM 溶液。将缓冲溶液脱水制备 RNA 寡核苷酸。重悬至 20 µM 会将缓冲液复溶为 10 mM Tris-HCl (pH 8.0)、20 mM NaCl 和 1 mM EDTA。

交货数量/纯度重悬方案
20 nmole 脱盐将 20 nmole 产物重悬于 1000 µl 不含 Rnase 水中，以制备 20 µM 溶液。
80 nmole 脱盐将 80 nmole 产物重悬于 800 µl 不含 Rnase 水中，以制备 100 µM 溶液。按 1:5 比例稀释以制备 20 µM 工作储备液。
1.0 µmole 脱盐将 1 µmole 产物重悬于 1 ml 不含 Rnase 水中，以制备 1mM 溶液。按 1:50 比例稀释以制备 20 µM 工作储备液。

Stealth RNAi 和 siRNA 转染浓度

Stealth RNAi siRNA 或 siRNA 双链的转染浓度通过将所用摩尔量除以取决于最终转染体积（即起始培养基体积加转染混合物体积）确定。使用强效 siRNA 时，我们通常通过针对24孔板中的每个孔向 500 µL 培养基（最终浓度 0.8 - 8 nM）中加入 100 µL 转染混合物来转染 0.5 – 5 pmol。要按比例放大，请增加 siRNA 数量使其浓度不变。我们建议使用能够敲低您基因的最低 siRNA 量，以避免任何非特异性或脱靶效应。

资源

确保您的基因沉默实验的有效交付、检测和结果解读

支持

如果您对产品或订购有任何疑问，请通过 RNAiSupport@thermofisher.com 联系我们