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流式细胞分析试剂和仪器的进步,使得研究人员能够开展日益复杂的多色实验多色流式细胞术,其中最大的一项挑战就是选择合适的荧光染料和抗体组合,最大限度减少对补偿和重叠调整的需求,同时保证数据质量和准确度不受影响。首先了解多色方案的基本原理之后,使用Invitrogen™ eBioscience™ 流式配色工具可以帮助您快速简单的找到您实验中需要的流式抗体组合。

流式细胞术多色方案设计基本原理
  • 流式仪器的配置(激光和滤光片)
  • 低丰度抗原搭配明亮染料,对高表达抗原搭配弱的荧光染料
  • 不同细胞亚群使用不同通道的荧光染料,避免荧光补偿
  • 多色方案应包含细胞活性染料,避免死细胞导致假阳性数据

了解更多流式技术及配色方案,请点击视频 - 给细胞化个妆-流式荧光染料介绍及多色配色方案

流式配色工具5步解锁多色方案

Step 1. 从下拉选单选择流式仪及带通滤片

Step 2. 选择蛋白指标

  • 先选择目标样本物种
  • 最主要是图示第3个位置的抗体指标Antibody you need, 点击+Add antigens后加入蛋白指标,指标右边还可以根据蛋白表达量低/中/高,调整Low/Medium/High作为后续匹配荧光染料强度使用。
  • 其它如果有实验室已使用中的抗体或是荧光蛋白跟细胞功能染料等可以一起加入panel设计,对应下图选择列表Antibody you already have and plan to use in your panel, Fluorescent proteins及 Non-antibody reagents.

Step 3. 根据前一步加入的蛋白指标表达丰度,工具会显示出可以提供的各种通道荧光抗体推荐阵列, 下方阵列表格里左上角的黑色三角标是根据步骤2您输入的蛋白表达丰度跟荧光染料强弱搭配原则推荐使用的通道。

点选其中一个通道,可以看到该通道里可以选用的不同荧光染料,及该染料的亮度Low-High,方便您逐一挑选合适的组合。

选定好通道跟抗体后,您可以从上方荧光光谱图确认整个panel荧光溢漏的情况

Step 4. 根据上一步选定的荧光组合,显示荧光通道可以选择的不同克隆号抗体货号,包含内部测试数据,已文献发表数量,价格包装等,点击链接看更详细的抗体介绍,建议用量及现货库存等信息

Step 5. 保存配色完成的方案,可储存成Excel或PDF档案请销售进行订购,如有赛默飞线上订购账号可直接提交订购。方案保存后还可以调出重新调整成新方案。

Step 1. 从下拉选单选择流式仪及带通滤片

Step 2. 选择蛋白指标

  • 先选择目标样本物种
  • 最主要是图示第3个位置的抗体指标Antibody you need, 点击+Add antigens后加入蛋白指标,指标右边还可以根据蛋白表达量低/中/高,调整Low/Medium/High作为后续匹配荧光染料强度使用。
  • 其它如果有实验室已使用中的抗体或是荧光蛋白跟细胞功能染料等可以一起加入panel设计,对应下图选择列表Antibody you already have and plan to use in your panel, Fluorescent proteins及 Non-antibody reagents.

Step 3. 根据前一步加入的蛋白指标表达丰度,工具会显示出可以提供的各种通道荧光抗体推荐阵列, 下方阵列表格里左上角的黑色三角标是根据步骤2您输入的蛋白表达丰度跟荧光染料强弱搭配原则推荐使用的通道。

点选其中一个通道,可以看到该通道里可以选用的不同荧光染料,及该染料的亮度Low-High,方便您逐一挑选合适的组合。

选定好通道跟抗体后,您可以从上方荧光光谱图确认整个panel荧光溢漏的情况

Step 4. 根据上一步选定的荧光组合,显示荧光通道可以选择的不同克隆号抗体货号,包含内部测试数据,已文献发表数量,价格包装等,点击链接看更详细的抗体介绍,建议用量及现货库存等信息

Step 5. 保存配色完成的方案,可储存成Excel或PDF档案请销售进行订购,如有赛默飞线上订购账号可直接提交订购。方案保存后还可以调出重新调整成新方案。


配色工具使用教学视频